24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 264  |  回复: 9
当前主题已经存档。

playboy723

金虫 (正式写手)

[交流] PCR的问题

请教各位:
我最近要构建一个载体,大概有1500bp左右,然后我用普通的Tag酶可以扩得出来,可是我用高保真的exTaq酶扩时却怎么也扩不出来,连内参GAPDH也扩不出来,我可以确定模板没有问题,请问各位遇到过这样的问题吗?我该怎么办?继续用普通Taq扩?可这样的错配会很多,即使连到载体上后续的测序也会很麻烦的,求教了。
为什么普通Taq酶可以扩出来而exTag反而扩不出来呢   请赐教  谢谢!!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiwei1

木虫 (小有名气)


asr(金币+1,VIP+0):thank u!
1500bp,错配也不至于很多吧.个人认为还是体系的问题
2楼2008-03-27 09:27:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

碧荷叶

铜虫 (初入文坛)

你用过Pfu酶吗?也是一种高保真PCR用酶。它有外切酶活性,会降解引物,引物要加大用量。你的exTaq有外切酶活性吗?个人认为可以试一下加大引物量。
3楼2008-03-27 09:38:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户


asr(金币+1,VIP+0):thank u! 欢迎常来o(∩_∩)o...
Taq的错配几率大概是千分之一吧,所以1500bp的片段可能会出现错配的碱基。如果用高保真酶扩不出来的话,就用Taq试试吧。有些时候就是这样,酶都是挺变态的东西。注意3·加A的问题。最好还是继续优化条件。
金币是赌出来的
4楼2008-03-27 13:28:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

playboy723

金虫 (正式写手)

是  我是要连到T载体上的  所以有些种类的高保真酶还不能用,很郁闷,所以还是倾向于继续用exTaq酶。我就想请教一下大家有遇到这种情况的吗  如果有该怎么办呢?
5楼2008-03-27 15:10:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)

换个新的吧,可能你的酶本身就有问题。
6楼2008-03-27 15:14:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyxleo

铜虫 (初入文坛)


asr(金币+1,VIP+0):这么做过吗?效果明显?
建议两种酶同时用,rTaq:pfu为1:3或者1:4,用pfu的buffer即可。
追求卓越,尽善尽美,不断完善自己。
7楼2008-03-27 22:21:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

playboy723

金虫 (正式写手)

呵呵  6楼得主意很好,我得试试   呵呵 谢谢啊
以前你这样做过吗?很有开创性的主意啊!!!
8楼2008-03-28 10:03:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

glenn_007

木虫 (小有名气)

有没有人用两种酶试试啊
很期待这个想法的结果
9楼2008-03-29 16:15:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunbinice

银虫 (初入文坛)

6楼的你这样做过?想试试啊呵呵呵
10楼2008-03-29 18:35:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 playboy723 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 352分-085602-一志愿985 +3 海纳百川Ly 2026-03-29 3/150 2026-03-29 07:15 by 380984326
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +12 zhubinhao 2026-03-27 12/600 2026-03-29 06:38 by 544594351
[考研] 275求调剂 +10 Micky11223 2026-03-25 14/700 2026-03-28 15:48 by Micky11223
[考研] 0703一志愿9,初试成绩:338,四六级已过,有科研经历,求调剂! +4 Zuhui0306 2026-03-25 4/200 2026-03-28 13:07 by 唐沐儿
[考研] 286求调剂 +12 PolarBear11 2026-03-26 12/600 2026-03-28 12:14 by zllcz
[考研] 085405 考的11408求各位老师带走 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 09:19 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 352分 化工与材料 +5 海纳百川Ly 2026-03-27 5/250 2026-03-28 03:39 by fmesaito
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕,求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 一志愿上海理工能源动力(085800)310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考博] 26申博 +3 加油冲啊! 2026-03-26 3/150 2026-03-27 15:38 by cls512
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 求调剂323材料与化工 +7 1124361 2026-03-24 7/350 2026-03-27 10:22 by wangjy2002
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 352求调剂 +4 大米饭! 2026-03-22 4/200 2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-26 4/200 2026-03-26 16:00 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
信息提示
请填处理意见