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蓝默儿金虫 (小有名气)
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夹心ELISA几种包被液尝试出现的问题 已有3人参与
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本人做双抗夹心ELISA：（酶标单抗自己标记，验证效价也比较高） 尝试过用辛酸-硫酸铵纯化多抗（小鼠血清）包被，酶标单抗作为检测抗体，但阴性，空白值比较高， 2.用三种未处理过的单抗腹水混合，包被，酶标单抗作为检测抗体，但阴性，空白值也比较高， 3.用辛酸-硫酸铵纯化一株单抗包被，酶标单抗作为检测抗体，但阴性，空白值比较高，阳性/阴性=2 分析：可能是自己的蛋白比较特殊，我的蛋白为炎性应激蛋白，考虑在制备多抗和腹水都是对小鼠的一种刺激，导致在血液及体液中此种蛋白会升高，刺激越强烈，血液及体液中此种蛋白越高。 后改后杂交瘤细胞上清包被，酶标单抗作为检测抗体，值是阳性=1.0，阴性=0.5，但还是很高，为什么会出现这中问题，杂交瘤细胞上清应该只用抗体，没有炎性蛋白了吧，值还是很高. 注：本人的包被做梯度稀释了，封闭液也尝试：脱脂乳，BSA，明胶。显色液也换了2种。都没有多大改观。  |
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