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蓝默儿

金虫 (小有名气)

[求助] 夹心ELISA几种包被液尝试出现的问题 已有3人参与

本人做双抗夹心ELISA:(酶标单抗自己标记,验证效价也比较高)
尝试过用辛酸-硫酸铵纯化多抗(小鼠血清)包被,酶标单抗作为检测抗体,但阴性,空白值比较高,
2.用三种未处理过的单抗腹水混合,包被,酶标单抗作为检测抗体,但阴性,空白值也比较高,
3.用辛酸-硫酸铵纯化一株单抗包被,酶标单抗作为检测抗体,但阴性,空白值比较高,阳性/阴性=2
分析:可能是自己的蛋白比较特殊,我的蛋白为炎性应激蛋白,考虑在制备多抗和腹水都是对小鼠的一种刺激,导致在血液及体液中此种蛋白会升高,刺激越强烈,血液及体液中此种蛋白越高。

后改后杂交瘤细胞上清包被,酶标单抗作为检测抗体,值是阳性=1.0,阴性=0.5,但还是很高,为什么会出现这中问题,杂交瘤细胞上清应该只用抗体,没有炎性蛋白了吧,值还是很高.

注:本人的包被做梯度稀释了,封闭液也尝试:脱脂乳,BSA,明胶。显色液也换了2种。都没有多大改观。
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微笑,自信,加油
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蓝默儿

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by panda73 at 2014-06-21 20:46:58
封闭液和酶标二抗中都加Tween20至终浓度0.1%,洗涤时用含0.1%Tween20的PBS。祝好运!

谢谢,洗涤时用含0.5%Tween20的PBS,感觉这个可能性不大
微笑,自信,加油
3楼2014-06-22 10:22:22
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
蓝默儿: 金币+1 2014-06-22 10:22:33
封闭液和酶标二抗中都加Tween20至终浓度0.1%,洗涤时用含0.1%Tween20的PBS。祝好运!
2楼2014-06-21 20:46:58
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心

【答案】应助回帖

既然封闭没有问题,那你包被和酶标单抗的浓度确定了吗?
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折!交流锤炼知识,用心构筑桥梁,以更优质的产品及技术服务助力科研;QQ:2513165427;Email:b
4楼2014-06-25 12:04:20
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swlsangon

木虫 (小有名气)

快乐的木虫

【答案】应助回帖

你是否考虑过显色液的问题呢?
生命在于运动
5楼2015-03-13 16:36:49
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