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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 可溶性蛋白在沉淀里面，不在上清液肿么办啊
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知之为知之a

新虫 (初入文坛)

[求助] 可溶性蛋白在沉淀里面，不在上清液肿么办啊 已有10人参与

做了好几次SDS-PAGE，设计的可溶性蛋白经过细胞破碎后，只发现在下层沉淀里面有表达的诱导蛋白，诱导温度30摄氏度，IPTG浓度0.5mM.时间5个小时。
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知之为知之
1楼 2014-06-18 08:19:30
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简牧风爱

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议小试检测

你需要上清表达，下面情况或许对你有用
1、降低诱导温度，最低可到15℃
2、降低IPTG浓度，0.1mM都可
3、构件时，考虑前面或后面带有增加可溶性的标签蛋白，GST等
4、诱导开始OD,高浓度不利于上清形成
5、诱导时间，当然时间往往影响表达量
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11楼2014-07-12 19:24:17
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
降低温度到18度，IPTG降低到0.1mM, 过夜诱导试试看？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-06-18 21:46:46
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
低温过夜诱导，在诱导前将对数期的菌液10到15℃预冷半小时试试
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爱拼才会赢
3楼2014-06-20 22:27:32
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sqd767019087

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
裂解buffer  ph   诱导温度 诱导od  菌有么有破碎完全

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-06-21 00:18:48
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