24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 987  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Lopick

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[交流] 怎么P一段基因的全长?

各位大仙,以下是我的基因全长
         1 atggcttctt tctttttctt tttttttgct gctatagatg agttgaagtt cacattttct
       61 agggtgggag ctccaccaga agtagtagca aggctagtag ctgcccgtca ggagtttgaa
      121 tccaaacaac gatcttcggt taattccaga gataatttga aagacccgga actagatcag
      181 ttcatggagg cttattgtga catgctgatg aagtaccgag aggagctgac aagacccatt
      241 caagaagcca tggattttat gcgaagaata gaaactcagc taaatatgat ctgcaacgga
      301 cccttgcgga tcttcaactc tgatgagaaa tctgagggtg ttggatcgtc tgaggaggat
      361 caagacaata gtggagggga aaccgaattg ccggagattg atcctcgggc tgaggaccga
      421 gaactaaaga accatttatt aaggaaatat agtggctatc taagcagtct aaagcaggaa
      481 ctttcaaaga agaagaagaa gggaaaacta cctaaagaag caaggcagaa gctacttagc
      541 tggtgggagc tacactacaa atggccatat ccttcggaga ccgagaaggt ggcactggca
      601 gaatcaactg gtttggacca gaaacaaata aataattggt tcataaatca gaggaaacga
      661 cattggaaac cctcggaaga catgcaattc atggtgatgg atggtctaca tccacagaat
      721 gcagctctgt atatggatgg tcactacatg ggtgatggtc catatcgtct aggaccatga
我设计的是前20,后20为上下引物,经检测引物设计不合理,特异性不强。希望各位指点,怎么设计引物才能P出该段基因的全长?必须用RACE吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzezhouay215

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

你这段序列是ORF吧,看看能不能找到它的5‘和3’UTR,在UTR上设计引物也可以。如果实在找不到UTR也可以是你设计的“前20,后20”引物上加两个保护碱基跑下PCR试试,也可能跑出你的全长来,这样的话测序时需要连到克隆载体后再测序,直接PCR产物测序的话,是不能测到你的引物序列的,希望能有帮助。
5楼2014-07-24 20:48:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

yuguiyan

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

上下游都扩大些

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-06-16 19:30:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


Lopick: 金币+1 2014-06-16 20:28:59
如果有基因组数据库的话,你要看看有没有同源性高的基因干扰哦,设计引物建议用primer-blast,效果好

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-06-16 19:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lau_Kimura

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


Lopick: 金币+1 2014-06-18 08:47:24
亲,您所给的序列是780bp长的mRNA,准确表达应该是cDNA全长,而不是“一段基因的全长”。——您要构建Ubi超表达载体?

BTW,您知道引物设计的重要原则不?http://refer.biovip.com/doc-view-8401.html

参考贴:克隆基因全长引物设计问题http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1644284
4楼2014-06-18 01:40:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 337求调剂 +9 《树》 2026-03-29 9/450 2026-04-01 18:05 by 记事本2026
[考研] 324分 085600材料与化工 +17 呆鹅oor 2026-03-27 17/850 2026-04-01 17:51 by JYD2011
[考研] 26考研调剂 +3 Wnz.20030617 2026-04-01 3/150 2026-04-01 17:22 by salamander`
[考研] 324求调剂 +10 hanamiko 2026-03-26 12/600 2026-04-01 16:59 by oooqiao
[考研] 0703一志愿南师大334求调剂 +4 seven7yu 2026-03-30 4/200 2026-04-01 16:10 by oooqiao
[考研] 一志愿武汉理工,总分321,英一数二,求老师收留。 +13 nnnnnnn5 2026-03-25 13/650 2026-04-01 14:51 by ningjing2014
[考研] 262求调剂 +9 励志一定发文章 2026-03-31 10/500 2026-04-01 12:22 by sunshine0013
[考研] 279求调剂 +6 莫xiao 2026-04-01 6/300 2026-04-01 11:11 by 逆水乘风
[考研] 环境工程 085701,267求调剂 +15 minht 2026-03-29 16/800 2026-04-01 10:13 by li_sujuan99
[考研] 一志愿武理材料工程302调剂环化或化工 +15 Doleres 2026-03-31 16/800 2026-04-01 09:49 by lfj11
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +18 zhubinhao 2026-03-27 18/900 2026-04-01 09:37 by oooqiao
[考研] 085602 307分 求调剂 +10 不知道叫什么! 2026-03-26 10/500 2026-03-31 19:53 by Dyhoer
[考研] 08开头看过来!!! +3 wwwwffffff 2026-03-31 5/250 2026-03-31 17:45 by 星光/
[考研] 340求调剂 +4 希望如此i 2026-03-31 4/200 2026-03-31 16:40 by 690616278
[考研] 考研调剂求助 +7 13287130938 2026-03-31 7/350 2026-03-31 16:39 by 690616278
[考研] 274求调剂 +6 xiao爱同学 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 303求调剂 +7 DLkz1314. 2026-03-30 7/350 2026-03-30 16:05 by shuang5186
[考研] 085701求调剂初试286分 +5 secret0328 2026-03-28 5/250 2026-03-30 12:54 by fangnagu
[考研] 356求调剂 +4 gysy?s?a 2026-03-28 4/200 2026-03-29 10:32 by 唐沐儿
[考研] 305求调剂 +8 RuiFairyrui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:22 by fmesaito
信息提示
请填处理意见