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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 怎么P一段基因的全长？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Lopick

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[交流] 怎么P一段基因的全长？

各位大仙，以下是我的基因全长
         1 atggcttctt tctttttctt tttttttgct gctatagatg agttgaagtt cacattttct
       61 agggtgggag ctccaccaga agtagtagca aggctagtag ctgcccgtca ggagtttgaa
      121 tccaaacaac gatcttcggt taattccaga gataatttga aagacccgga actagatcag
      181 ttcatggagg cttattgtga catgctgatg aagtaccgag aggagctgac aagacccatt
      241 caagaagcca tggattttat gcgaagaata gaaactcagc taaatatgat ctgcaacgga
      301 cccttgcgga tcttcaactc tgatgagaaa tctgagggtg ttggatcgtc tgaggaggat
      361 caagacaata gtggagggga aaccgaattg ccggagattg atcctcgggc tgaggaccga
      421 gaactaaaga accatttatt aaggaaatat agtggctatc taagcagtct aaagcaggaa
      481 ctttcaaaga agaagaagaa gggaaaacta cctaaagaag caaggcagaa gctacttagc
      541 tggtgggagc tacactacaa atggccatat ccttcggaga ccgagaaggt ggcactggca
      601 gaatcaactg gtttggacca gaaacaaata aataattggt tcataaatca gaggaaacga
      661 cattggaaac cctcggaaga catgcaattc atggtgatgg atggtctaca tccacagaat
      721 gcagctctgt atatggatgg tcactacatg ggtgatggtc catatcgtct aggaccatga
我设计的是前20，后20为上下引物，经检测引物设计不合理，特异性不强。希望各位指点，怎么设计引物才能P出该段基因的全长？必须用RACE吗？
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1楼 2014-06-16 18:28:14
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lzezhouay215

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
你这段序列是ORF吧，看看能不能找到它的5‘和3’UTR，在UTR上设计引物也可以。如果实在找不到UTR也可以是你设计的“前20，后20”引物上加两个保护碱基跑下PCR试试，也可能跑出你的全长来，这样的话测序时需要连到克隆载体后再测序，直接PCR产物测序的话，是不能测到你的引物序列的，希望能有帮助。
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5楼2014-07-24 20:48:53
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yuguiyan

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
上下游都扩大些

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2楼2014-06-16 19:30:20
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Neo2000

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
Lopick: 金币+1 2014-06-16 20:28:59
如果有基因组数据库的话，你要看看有没有同源性高的基因干扰哦，设计引物建议用primer-blast，效果好

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3楼2014-06-16 19:51:10
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Lau_Kimura

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
Lopick: 金币+1 2014-06-18 08:47:24
亲，您所给的序列是780bp长的mRNA，准确表达应该是cDNA全长，而不是“一段基因的全长”。——您要构建Ubi超表达载体？

BTW，您知道引物设计的重要原则不？http://refer.biovip.com/doc-view-8401.html

参考贴：克隆基因全长引物设计问题http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1644284
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4楼2014-06-18 01:40:15
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