PCR产物可以直接用来做酶切吗？ - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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傻子

木虫 (正式写手)

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reasonspare(金币+0,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心.而且很有幽默,但是不要让人误会你的意思.

引用回帖:

Originally posted by annwt at 2008-3-24 20:57:
我还看了你的另一个帖子，知道你酶切是连接转化，如果酶切位点在PCR产物的两端，PCR产物酶切后很难判断是否切开，以至影响下一步的连接转化，如果一次成功没的说,如果多次失败,建议先回收加A连T载体转化，再提质粒 ...

同意，有时候无法确定是否切开，这么做比较保险，不差那么一步吧。直接切有时候要看人品滴……^_^

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1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能，国家免检优质产品。

11楼2008-03-25 12:39:06

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xiukuncui

木虫 (正式写手)

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reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心

可以是可以，但是PCR反应体系中所含的buffer等，可能对某些酶的酶切产生负面影响，最好是回收后再酶切。

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12楼2008-03-25 22:04:38

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zhua666

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reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心

没有问题的，双酶切可以分步切，如果温度一样，可以将BUFFER 混合后同时切

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13楼2008-03-26 23:13:15

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qwop654

禁言 (小有名气)

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reasonspare(金币+2,VIP+0):thx,

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14楼2008-03-27 10:40:25

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hamimeloncenter

铜虫 (初入文坛)

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没有做过尝试，也没有好的建议。随意来逛逛，学习学习。

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－－相识既是缘分－－

15楼2008-03-27 11:48:09

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sunbinice

银虫 (初入文坛)

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★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心

个人认为还是不要直接切

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16楼2008-03-27 20:14:06

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njml

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可以，我们实验室就有很多人用PCR产物直接酶切，前提是无杂带，且目的带比较亮

17楼2008-04-05 22:00:21

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figo.339

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用加A试剂盒先加A然后连载体再酶切吧，这样效果比较好！

18楼2008-04-06 13:34:12

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ganchao1776

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我一般都是回收后再双酶切的，一般引物设计的时候多设计几个保护碱基就很好切，你要是实在切不开就连了t载体再切吧，不过挺麻烦的，感觉还是实验设计的时候多作些工作后边就省力了

19楼2008-04-06 14:19:46

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威风之狼

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选好双酶切的BUFFER 如果PCR两端有酶切位点的保护性碱基
要纯化能否切开无法区别但双酶切连接是比较容易的

[ Last edited by 威风之狼 on 2008-4-7 at 10:17 ]

20楼2008-04-07 10:16:14

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