24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

306495799

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 153.7
红花: 1
帖子: 273
在线: 230.9小时
虫号: 1921423
注册: 2012-08-02
性别: GG
专业: 食品科学基础

[求助] 复杂模板，pcr，求指导？？？已有5人参与

复杂模板，染色体脆性位点附近，全基因组PCR换了6对对引物p不出来，主要是杂带太多，主带不明显，切胶回收再进行巢式pcr也试了，同一对引物巢式pcr产物切胶回收测序结果也不对，，换更短片段的引物做巢式pcr主带基本看不见了，杂带还是很多，求指导？？？我要扩增产物必须包括360~560大小
http://muchong.com/bbs/post.php?action=newthread&fid=366

>gi|568815591|ref|NC_000007.14|:128207397-128208617 Homo sapiens chromosome 7, GRCh38 Primary Assembly
1       GTGGGAACTG GGTGTACTGA CACTGTGGAA CCAAGGAAGC ACCACGGCTG CAGAGAGACC
61    CTGGGCCAGA CCATCCAAAT GAAGCCCAGG CACAGCAGAG GGCTCTGAGG AGGCGCAGGA
121    TGCAGGAGAT GAAAGGGGAA AATGAAGGGG AGCCGCAGGT TCAAACTGCC CCTTCCCAGG
181    AGTGAGCTAC AGCTTGGCCA CTTCTGTCTC ATAAGAAGGA GGTTGTGACT TTGGGAGGTG
241    GAGGGGGATT ACAGCTGGGA TTCCTGTTGC CTGCCTCCTG CCTCTGGGGC TCTCAGCTTT
301    CTCTTCTCCC CAGGACTCTT TTCTTCCTCT CCCCCCACCT CCCCCCCCAC TCCCCTCCTC
361    CCCCTAGGTC CTGGCTCTCC CTCCCCGACC CGGTCTTCTT GGTACCAGCT AAGCCCTGGA
421    GGGGCCACAG CCTCCCCTCC AGCCCCCCTG CCATGGGATG GCTGCTGTCT CCTTTGGATC
481    TTTTTGCGGT CTGGGCTTGC TGTTCCTCTC AACAGTAGTC AGGAAGCCCT TACCCCAAAA
541    AGTATCTGCG GGAGGCCTTG TCCACAGGGG AGGCTGCCCC AAGGGCTCCA GGTGAGTCAC
601    AGCAAACCCA AGAACAGTGA ATGGAACTGG GGTCTCCTGG CTCTCCTTTA GAGTTGCTGA
661    GTGACTTTAA GTCCAGCACT GAGCCTCTCT GGGCCTCACT TATGCCACTC TTTTCATCAT
721    TTACCAGTGG GCAATGTCAA GTGAGAGACT CCACAGATAA GAAAAATAAA GGAGTGGCTC
781    AATTACATGC CAGGGAAAAC CGCTTTGGTG GATGAAGGTC ACACAGCTCT CCCAGCATTC
841    TGTCCTCTGT ATACAGATGA TCTCCTTCTG AAATCCTTTT GGGGATGACC CCCTTCCACA
901    CCATGGACAC TTCTGGGTGG GTTGTCACTC AAGAGGTCCT GCCCTCTTCT GCCCACTGGG
961    TGGACACAAG AATTGAAATC TGTAAAGGAT ACTGAGATTG GGAACAAAAT AATTGATGCT
1021    GATTGATCCC AGCAGTGTAT GGCGAGAAGA TGACAAGCTT CCACTGCCTG TATCACTGAC
1081    TTGCCTAATG TCTGCCCTGC CCTGGCCTGG ATCTTAACCG CGCCCTTCAT TCTGTGAACT
1141    ACCCCCAAAT CCTTCAAATA AAGTCCTTGA TTGCTTGTTA GAGTCAATAA TATTGCTTGC
1201    TGAGGATCCA GAGACCTCTA G

回复此楼

» 猜你喜欢

也许似乎大概是，然而未必不见得

1楼 2014-06-11 10:26:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

应助: 72 (初中生)
金币: 1513.9
红花: 7
帖子: 202
在线: 164.5小时
虫号: 1952690
注册: 2012-08-23
性别: MM
专业: 理论法学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
306495799(gyesang代发): 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 10:50:06

你是用的TaKara的酶吗？既然你的另外一个位置的基因片段能扩增出来，说明模板没有问题，换新的酶，同样的程序，可能的原因有以下几个：
1. 引物的质量是否有保证，反复冻融多次引物的效果不会像以前那么好；
2. 不同批次的酶存在一定差异，你的另外一个位置的基因比较容易扩增出来，但是745 bp的基因比较难扩出来，不同批次的酶的效果有少许的差别，也能导致扩增出不来。
建议解决方法：
1. 重新从100 uM的引物稀释至10 uM，用于PCR
2. 再重新拆一支酶试试，配体系时一定要要认真。