24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 703  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

davidck

金虫 (正式写手)

[交流] 急急急!连接问题!请虫友帮忙!

我的目的基因将近3Kb,一直连不上T载体(TaKaRa PMD19-T),用的是Pfu扩的基因,PCR后直接在反应产物加了Taq用来加A,然后胶回收,转化,转化菌长出的有不少白斑,挑了十几个都是假阳性。所以怀疑是不是加A和纯化有问题。
   我想请虫友们帮忙分析一下,我下面的实验方案是否可行。在PCR结束后,先切胶回收,再进行Taq加A反应,之后再用PCR产物回收试剂盒回收纯化一下,然后再做连接转化
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)

加A应该是关键,否则无法连接,也就没有真阳性,胶回收,加A,连接一气呵成,最好不停,3K比较长了,感受态不用买的,就用超感。
6楼2008-03-23 21:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

用Taq plus+不好吗?混合酶Pfu、Taq,省事
细推物理须行乐。
2楼2008-03-23 13:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greenspringmi

银虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
你的目的片断有点大,你做的步骤是对的。
不用先回收再加尾巴。
大一点的片断连接时:目的片断的量要足;感受态要好;可以适当延长连接的时间。
假阳性多时,在保证载体没有问题时(做个空载体的对照),可以适当提高目的片断和载体的比例(一般,6/1-10/1)。
祝你好运哦!
3楼2008-03-23 13:37:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mark32280667806

先看看你的载体做的这么样?自链的多不多?如果载体做的好,一般没什么问题,另外,你做的程序,没什么问题
4楼2008-03-23 15:40:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085601材料工程找调剂 +14 oatmealR 2026-03-29 15/750 2026-03-29 21:48 by plmuchong
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-29 20:21 by dophin1985
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研经历 +7 cccchenso 2026-03-29 7/350 2026-03-29 15:00 by 唐沐儿
[考研] 一志愿郑州大学,080500学硕,总分317分求调剂 +8 举个栗子oi 2026-03-24 9/450 2026-03-29 13:08 by peike
[考研] 279求调剂 +4 蝶舞轻绕 2026-03-29 4/200 2026-03-29 09:45 by laoshidan
[考研] 0856求调剂 +13 zhn03 2026-03-25 14/700 2026-03-29 08:13 by fmesaito
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利|求调剂 +7 Micky11223 2026-03-25 7/350 2026-03-28 18:34 by 无际的草原
[考研] 085405 考的11408求各位老师带走 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 09:19 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 286求调剂 +4 丢掉懒惰 2026-03-27 7/350 2026-03-28 08:07 by baoball
[考研] 07化学280分求调剂 +10 722865 2026-03-23 10/500 2026-03-27 15:51 by Plutoqq
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +5 SYA! 2026-03-23 5/250 2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 26考研-291分-厦门大学(085601)-柔性电子学院材料工程专业求调剂 +3 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:22 by xcjcqu
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
信息提示
请填处理意见