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yaoyaochong

银虫 (正式写手)

[交流] 割胶回收

最近割胶回收DNA样品以后重新再跑电泳,发现电泳上方一厘米处有一条带,起初以为是自己割胶没有切干净,后来又对回收的样品重新割胶回收,而且延长了电泳的时间,电泳图上已经可以看到目的带和杂带已经完全分离了,可是我重新割胶回收完以后,跑电泳发现那条杂带还在,究竟是什么问题,请大家帮帮忙,注:是PCR产物割胶回收
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tody4617

木虫 (小有名气)

一根筋家族之独根草

你纯化一下看行不行
票子-房子-车子-婆子-儿子
2楼2008-03-23 09:40:22
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)

怎么纯化?我把样品重新电泳,又割胶纯化还是不行呀
3楼2008-03-23 09:47:18
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greenspringmi

银虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
嗬嗬,本人遇到过的,
可以把你的胶图传上来看看吗?
在保证电泳缓冲液是新的,切胶和回收的过程(试剂盒没有污染)中没有污染,回收检测还是有那条讨厌的杂带时(请问回收了片断的目的是什么呢?如果用于载体连接时,只要目的片断的量比杂带远远的大,不会影响连接的。我做出来过。),可以不予理会,继续下面的试验。
4楼2008-03-23 13:46:20
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挥汗如雨

至尊木虫 (职业作家)

换换电泳槽中的电泳液看看,是不是电泳液中污染了其他DNA!?
人生有三样东西不可挽回:时间,机遇,还有说出去的话。
5楼2008-03-23 13:47:30
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)

有可能,不过后来那次割胶回收我是新换的电泳缓冲液,那条杂带还很明显,如果是电泳槽污染,那么空白的泳道里也应该有这条带吧,以前我们也这样操作,可是就没事,唯一和以前不同的是我们换了回收试剂盒,以前用的是TIANgel的,现在是Bioteke的,,还有我们是要得到PCR片段进行基因敲出的,担心得到的里面掺假了质粒,不过跑电泳比对了一下,那条杂带不是质粒带,对实验有没有影响还不知道
6楼2008-03-23 15:53:56
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

这个我没有遇到过,kit的赚疑最大
7楼2008-03-24 00:01:32
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synhily

木虫 (正式写手)

这个问题我现在也遇到了,我的目的基因在1600左右,可是3000-5000之间总有一条很亮的杂带。

我的割胶回收后的1600左右的目的片段是要与酵母上的某段基因进行同源重组,且最后不需要敲出1600的片段。请问存在3000-5000这条杂带对后续实验有影响吗?还有就是为什么它一直存在?

“kit的赚疑最大”,kit是什么意思啊?

[ Last edited by synhily on 2008-3-24 at 11:25 ]
8楼2008-03-24 11:16:57
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ypan

木虫 (著名写手)

8楼的
kit就是试剂盒的意思!
我以前也有这样的情况,后来换了试剂盒,缓冲液,彻底清洗电泳槽,所有问题都解决了!
顺便说一句,以前老是用TIANGEN的试剂盒,后来发现TIANGEN试剂盒质量不是很稳定,总是会出现一些奇怪的现象!
9楼2008-03-24 11:25:33
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synhily

木虫 (正式写手)

谢谢9楼的回复啊,也感谢楼主给我们在这里讨论这个话题的机会。
10楼2008-03-24 11:33:48
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