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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 割胶回收
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)

[交流] 割胶回收

最近割胶回收DNA样品以后重新再跑电泳，发现电泳上方一厘米处有一条带，起初以为是自己割胶没有切干净，后来又对回收的样品重新割胶回收，而且延长了电泳的时间，电泳图上已经可以看到目的带和杂带已经完全分离了，可是我重新割胶回收完以后，跑电泳发现那条杂带还在，究竟是什么问题，请大家帮帮忙，注：是PCR产物割胶回收
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1楼 2008-03-23 09:34:45
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tody4617

木虫 (小有名气)

一根筋家族之独根草
你纯化一下看行不行
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票子-房子-车子-婆子-儿子
2楼2008-03-23 09:40:22
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)
怎么纯化？我把样品重新电泳，又割胶纯化还是不行呀
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3楼2008-03-23 09:47:18
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
嗬嗬，本人遇到过的，
可以把你的胶图传上来看看吗？
在保证电泳缓冲液是新的，切胶和回收的过程（试剂盒没有污染）中没有污染，回收检测还是有那条讨厌的杂带时（请问回收了片断的目的是什么呢？如果用于载体连接时，只要目的片断的量比杂带远远的大，不会影响连接的。我做出来过。），可以不予理会，继续下面的试验。
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4楼2008-03-23 13:46:20
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挥汗如雨

至尊木虫 (职业作家)
换换电泳槽中的电泳液看看，是不是电泳液中污染了其他DNA！？
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人生有三样东西不可挽回：时间，机遇，还有说出去的话。
5楼2008-03-23 13:47:30
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)
有可能，不过后来那次割胶回收我是新换的电泳缓冲液，那条杂带还很明显，如果是电泳槽污染，那么空白的泳道里也应该有这条带吧，以前我们也这样操作，可是就没事，唯一和以前不同的是我们换了回收试剂盒，以前用的是TIANgel的，现在是Bioteke的，，还有我们是要得到PCR片段进行基因敲出的，担心得到的里面掺假了质粒，不过跑电泳比对了一下，那条杂带不是质粒带，对实验有没有影响还不知道
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6楼2008-03-23 15:53:56
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
这个我没有遇到过，kit的赚疑最大
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7楼2008-03-24 00:01:32
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synhily

木虫 (正式写手)
这个问题我现在也遇到了，我的目的基因在1600左右，可是3000-5000之间总有一条很亮的杂带。

我的割胶回收后的1600左右的目的片段是要与酵母上的某段基因进行同源重组，且最后不需要敲出1600的片段。请问存在3000-5000这条杂带对后续实验有影响吗？还有就是为什么它一直存在？

“kit的赚疑最大”，kit是什么意思啊？

[ Last edited by synhily on 2008-3-24 at 11:25 ]
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8楼2008-03-24 11:16:57
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ypan

木虫 (著名写手)
8楼的
kit就是试剂盒的意思！
我以前也有这样的情况，后来换了试剂盒，缓冲液，彻底清洗电泳槽，所有问题都解决了！
顺便说一句，以前老是用TIANGEN的试剂盒，后来发现TIANGEN试剂盒质量不是很稳定，总是会出现一些奇怪的现象！
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9楼2008-03-24 11:25:33
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synhily

木虫 (正式写手)
谢谢9楼的回复啊，也感谢楼主给我们在这里讨论这个话题的机会。
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10楼2008-03-24 11:33:48
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