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伊梦青lhq

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增跑胶 已有2人参与

各位大虾，求助啦！
我用提取的RNA进行反转录，然后用所得的cDNA进行PCR扩增。分别扩增了3个基因，c-myc，β-actin和hTERT，其中c-myc和β-actin都可以跑出条带，只有hTERT没有条带，做了三次，结果都是空白，胶上什么都没有，这是怎么回事，问题出在哪呢？
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1楼 2014-06-09 18:07:05
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伊梦青lhq

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-11 11:12:17
还有，72度延伸时间不要那么长，30s~1min足矣，你这个基因目的产物长度好像只有200多bp....

非常非常感谢您的帮助和建议，我试一下。
我用hepG2细胞做western blot，可以看到hTERT蛋白的条带，是否可以说明这个hepG2细胞是可以表达hTERT？
另外我想问一下您是用什么方法看出这个引物没问题的呢？
我用一个在线软件看了一下
http://biocompute.bmi.ac.cn/CZlab/MFEprimer-2.0/，
怎么得到的序列并不是hTERT（ ttaggg ）的重复序列呢，或者是我看不懂其结果中seq2+seq1中间那一段序列，这指的是什么呢？

谢谢！
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15楼2014-06-11 21:26:53
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
伊梦青lhq: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 学习了！ 2014-06-11 10:39:41
你用的什么组织或细胞提的RNA？可能是引物出了问题？
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2楼2014-06-09 18:30:28
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伊梦青lhq

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-09 18:30:28
你用的什么组织或细胞提的RNA？可能是引物出了问题？

HepG2 人肝癌细胞，其他的两个基因都可以跑出条带来的。
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3楼2014-06-09 19:43:20
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 伊梦青lhq at 2014-06-09 19:43:20
HepG2 人肝癌细胞，其他的两个基因都可以跑出条带来的。...

检查一下引物的序列
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4楼2014-06-09 20:37:12
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