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PCR阴性对照出条带，但是内参没有，换了一管新的引物还是有条带 已有4人参与
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| 请教各位大神，PCR阴性对照（没有cDNA，只有引物、水、taq酶）出条带，而且大小正好是我的目的基因大小，循环32圈，但是内参的阴性没有条带，这是为什么呢！以为是引物被污染了，但是换了一管新的，还是有目的条带！ |
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凌波丽
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【答案】应助回帖
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karuirui(西门吹雪170代发): 金币+5, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:33:32
karuirui(西门吹雪170代发): 金币+5, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:33:32
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楼主的实验结果即使不是由于：微量移液器没有过滤膜，也没有消毒棉在微量移液器的杆身与接头之间形成阻塞，导致你在使用微量移液器吸取目的cDNA样品液时形成了目的cDNA气雾胶，而且cDNA气雾胶肯定会残留在微量移液器的杆身里；也必定是cDNA污染了阴性对照实验体系造成的，因为其他种类的DNA扩增出来不大可能是在电泳时正好与目的DNA相同，而且多次重复出现。 阴性对照反应体系被目的cDNA样品污染，导致了不该出现的cDNA扩增带出现。 这种污染的原因与解决方法： （1）在微量移液器的接头和吸杆之间加上脱脂消毒棉花或者购买有滤膜的微量移液器，防止将目的cDNA样品吸入微量移液器内。 （2）除了DNA聚合酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。 （3）所用离心管及样进枪头等均应一次性使用。必要时，在加标本前，反应管和试剂用紫外线照射，以破坏存在的核酸。 （4）使用新的超纯水。 （5）对于PCR实验室充分通风，以防止空气中残留有cDNA样品或其他DNA的气溶胶。 （6）有条件的话，把PCR扩增实验和阴性对照实验在不同的实验室完成。 此文内容是我根据楼主的实验想象刚刚写出来的，个人意见仅供参考。 |
14楼2014-07-09 02:45:17
youlinglyw
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2楼2014-06-08 17:26:04
3楼2014-06-09 10:52:29
youlinglyw
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4楼2014-06-09 11:41:26