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yilunanxia

金虫 (正式写手)

[求助] LAMP 已有1人参与

小弟最近在做LAMP,可是扩增了几次都是只出现了一条条带,大约3-4kb,请问一般是啥原因啊。
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fwywm

新虫 (初入文坛)

我最近也在做LAMP,情况和你差不多,那是没发生反应吧?还是模板DNA,我也不知道什么原因,楼主现在解决了吗?求指教啊
2楼2014-06-05 11:10:59
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yilunanxia

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fwywm at 2014-06-05 11:10:59
我最近也在做LAMP,情况和你差不多,那是没发生反应吧?还是模板DNA,我也不知道什么原因,楼主现在解决了吗?求指教啊

明天跑一个空白试试。我觉得可能我的酶有问题。
3楼2014-06-05 11:52:34
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谢伊莹

木虫 (正式写手)

想问一下,你做LAMP有假阳性的情况出现么,怎么避免的呢?
4楼2014-07-21 16:43:45
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yilunanxia

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 谢伊莹 at 2014-07-21 16:43:45
想问一下,你做LAMP有假阳性的情况出现么,怎么避免的呢?

空白对照也是假阳性么?
5楼2014-07-21 20:27:39
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谢伊莹

木虫 (正式写手)

★ ★
yilunanxia(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-22 20:46:15
引用回帖:
5楼: Originally posted by yilunanxia at 2014-07-21 20:27:39
空白对照也是假阳性么?...

对。我有两套引物,第一次做,设置反应时间45 min,两套都阴;第二次延长至90min,第二套样品阳,空白阴,第一套全阴。然后想重复第二套,就是样品阳,对照也阳了,换了新稀释的引物,新的水,带口罩,戴手套,还是不行,样品阳,对照也阳
6楼2014-07-22 12:52:39
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yilunanxia

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 谢伊莹 at 2014-07-22 12:52:39
对。我有两套引物,第一次做,设置反应时间45 min,两套都阴;第二次延长至90min,第二套样品阳,空白阴,第一套全阴。然后想重复第二套,就是样品阳,对照也阳了,换了新稀释的引物,新的水,带口罩,戴手套,还是 ...

我的经验是反应时间90min没问题。对照阳性这个好麻烦,你说水引物 都换了,就还剩他的mix和enzyme了。不行开一套新的试试。我不清楚你做的是啥,我以前做过肠杆菌科的PCR检测,经常出现对照阳性,是因为我用的dd水污染了,然后用水性滤膜过滤就好了。
7楼2014-07-22 18:44:05
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谢伊莹

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yilunanxia at 2014-07-22 18:44:05
我的经验是反应时间90min没问题。对照阳性这个好麻烦,你说水引物 都换了,就还剩他的mix和enzyme了。不行开一套新的试试。我不清楚你做的是啥,我以前做过肠杆菌科的PCR检测,经常出现对照阳性,是因为我用的dd水 ...

我做的是食品中的菌,直接做的LAMP,以前做的PCR都是为了获得做LAMP的目的片段序列,dd水是用0.22的膜滤一下么?还想问一下,体系里的mg2+是自己配置的么,用的什么纯度的,分析,色谱?十分感谢~
8楼2014-07-23 22:58:55
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yilunanxia

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 谢伊莹 at 2014-07-23 22:58:55
我做的是食品中的菌,直接做的LAMP,以前做的PCR都是为了获得做LAMP的目的片段序列,dd水是用0.22的膜滤一下么?还想问一下,体系里的mg2+是自己配置的么,用的什么纯度的,分析,色谱?十分感谢~...

那你要考虑一个问题是水里是否也有可能有这种菌,如果有就用无菌的0.22的滤膜过滤。体系这个按照说明书来吧(如果你用的试剂盒),我当时用的试剂盒,所以就没在意。真的需要额外添加Mg的话你可以从TaKaRa买啊。为啥自己配。。。。
9楼2014-07-23 23:38:54
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谢伊莹

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by yilunanxia at 2014-07-23 23:38:54
那你要考虑一个问题是水里是否也有可能有这种菌,如果有就用无菌的0.22的滤膜过滤。体系这个按照说明书来吧(如果你用的试剂盒),我当时用的试剂盒,所以就没在意。真的需要额外添加Mg的话你可以从TaKaRa买啊。为 ...

我是自己构建试剂盒,自己摸索体系,水已经灭过菌了,但是DNA还是会存在,都没办法了,整个换体系花钱又多,唉~
10楼2014-07-24 11:21:33
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