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yilunanxia

金虫 (正式写手)

[求助] LAMP 已有1人参与

小弟最近在做LAMP，可是扩增了几次都是只出现了一条条带，大约3-4kb，请问一般是啥原因啊。
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1楼 2014-06-04 20:21:29
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fwywm

新虫 (初入文坛)
我最近也在做LAMP，情况和你差不多，那是没发生反应吧？还是模板DNA，我也不知道什么原因，楼主现在解决了吗？求指教啊
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2楼2014-06-05 11:10:59
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yilunanxia

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fwywm at 2014-06-05 11:10:59
我最近也在做LAMP，情况和你差不多，那是没发生反应吧？还是模板DNA，我也不知道什么原因，楼主现在解决了吗？求指教啊

明天跑一个空白试试。我觉得可能我的酶有问题。
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3楼2014-06-05 11:52:34
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谢伊莹

木虫 (正式写手)
想问一下，你做LAMP有假阳性的情况出现么，怎么避免的呢？
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4楼2014-07-21 16:43:45
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yilunanxia

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 谢伊莹 at 2014-07-21 16:43:45
想问一下，你做LAMP有假阳性的情况出现么，怎么避免的呢？

空白对照也是假阳性么？
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5楼2014-07-21 20:27:39
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谢伊莹

木虫 (正式写手)
★ ★
yilunanxia(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-22 20:46:15
引用回帖:
5楼: Originally posted by yilunanxia at 2014-07-21 20:27:39
空白对照也是假阳性么？...

对。我有两套引物，第一次做，设置反应时间45 min，两套都阴；第二次延长至90min，第二套样品阳，空白阴，第一套全阴。然后想重复第二套，就是样品阳，对照也阳了，换了新稀释的引物，新的水，带口罩，戴手套，还是不行，样品阳，对照也阳
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6楼2014-07-22 12:52:39
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yilunanxia

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 谢伊莹 at 2014-07-22 12:52:39
对。我有两套引物，第一次做，设置反应时间45 min，两套都阴；第二次延长至90min，第二套样品阳，空白阴，第一套全阴。然后想重复第二套，就是样品阳，对照也阳了，换了新稀释的引物，新的水，带口罩，戴手套，还是 ...

我的经验是反应时间90min没问题。对照阳性这个好麻烦，你说水引物 都换了，就还剩他的mix和enzyme了。不行开一套新的试试。我不清楚你做的是啥，我以前做过肠杆菌科的PCR检测，经常出现对照阳性，是因为我用的dd水污染了，然后用水性滤膜过滤就好了。
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7楼2014-07-22 18:44:05
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谢伊莹

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yilunanxia at 2014-07-22 18:44:05
我的经验是反应时间90min没问题。对照阳性这个好麻烦，你说水引物 都换了，就还剩他的mix和enzyme了。不行开一套新的试试。我不清楚你做的是啥，我以前做过肠杆菌科的PCR检测，经常出现对照阳性，是因为我用的dd水 ...

我做的是食品中的菌，直接做的LAMP，以前做的PCR都是为了获得做LAMP的目的片段序列，dd水是用0.22的膜滤一下么？还想问一下，体系里的mg2+是自己配置的么，用的什么纯度的，分析，色谱？十分感谢~
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8楼2014-07-23 22:58:55
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yilunanxia

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 谢伊莹 at 2014-07-23 22:58:55
我做的是食品中的菌，直接做的LAMP，以前做的PCR都是为了获得做LAMP的目的片段序列，dd水是用0.22的膜滤一下么？还想问一下，体系里的mg2+是自己配置的么，用的什么纯度的，分析，色谱？十分感谢~...

那你要考虑一个问题是水里是否也有可能有这种菌，如果有就用无菌的0.22的滤膜过滤。体系这个按照说明书来吧（如果你用的试剂盒），我当时用的试剂盒，所以就没在意。真的需要额外添加Mg的话你可以从TaKaRa买啊。为啥自己配。。。。
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9楼2014-07-23 23:38:54
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谢伊莹

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yilunanxia at 2014-07-23 23:38:54
那你要考虑一个问题是水里是否也有可能有这种菌，如果有就用无菌的0.22的滤膜过滤。体系这个按照说明书来吧（如果你用的试剂盒），我当时用的试剂盒，所以就没在意。真的需要额外添加Mg的话你可以从TaKaRa买啊。为 ...

我是自己构建试剂盒，自己摸索体系，水已经灭过菌了，但是DNA还是会存在，都没办法了，整个换体系花钱又多，唉~
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10楼2014-07-24 11:21:33
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