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切片问题 已有3人参与
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各位大侠，小女子这厢有礼了！ 切入主题！ 只知道某个腺体的具体位置，现在要做这个腺体的发育，我该如何切片，材料十分的小，发育成熟，肉眼也不能见，请问各位亲，我该如何操作呀，感谢感谢！  |
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还是植物好
版主 (著名写手)
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【答案】应助回帖
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1．取材 选取老嫩适中的叶片，将叶片经中脉切成5mm×5mm大小的块，选取合适的叶柄切取约5mm。 2．固定 将截取的叶片和叶柄放入FAA（甲醛：冰乙酸：乙醇（50%）按照 1：1：18 的比例配制）中固定，固定时间应不少于 48 小时。 3．脱水 用乙醇作为脱水剂，经梯度浓度65%→75%→85%→95%→100%→100%逐级脱水，每个浓度梯度脱水2小时，100%乙醇时间减半，且分两次进行，第一次35分钟，第二次25分钟。 4．透明 以二甲苯为透明剂，经 2/3 无水乙醇+1/3 二甲苯→1/2 无水乙醇+1/2 二甲苯→1/3 无水乙醇+2/3 二甲苯→纯二甲苯，不断增加二甲苯的比例，逐级透明，每级透明时间为 1小时。为使透明效果更好，可以用纯二甲苯透明两次，每次 1 小时。 5．浸蜡 先用低熔点的切片石蜡（52℃-54℃）在 30℃下浸蜡 24 小时，然后用由蜂蜡（熔点58℃-60℃）和低熔点切片石蜡按 1：9 的质量比融合在一起的混合石蜡在温箱中 60℃保温、浸蜡，每3小时换一次混合石蜡，重复进行两次，共 6 小时。 6．包埋 材料浸蜡结束后马上用镊子转移到装有液态上述混合石蜡的小纸盒中，并迅速冷却；使材料的轴性系统垂直于纸盒的底部，以便于蜡块的切修，做材料横切观察其横截面结构。镊子在使用前应先预热，以免材料粘附在镊子上损坏材料。 7．切片 根据材料在蜡块中的位置和方向，将蜡块修成梯形，然后粘到切片机的蜡台上进行切片。本实验采用旋转式手摇切片机，切片厚度8－12微米。 8．展片及粘片 在洁净的载玻片上均匀涂上少许蛋白甘油，将蜡带放入45－53℃的水浴锅中，待蜡带展平后，用涂有蛋白甘油的载玻片将它捞起，使蜡带光面紧贴载玻片，然后在 35℃温箱中烘干，蜡带就粘附在载玻片上了。 9．脱蜡和染色 二甲苯脱蜡后采用番红固绿复染法染色。 10．封片及观察 用中性树胶封片后，将切片放入 35℃温箱中烘干。数日后可进行观察和光学显微摄影。 |
3楼2014-06-09 16:45:04
2楼2014-06-05 05:11:49
4楼2014-06-18 10:54:16
