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叶子1983

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于聚丙烯酰胺凝胶电泳

最近实验出了一些问题
我做的是核酸DNA的,请问聚丙烯酰胺溶液的浓度比例如何?跑胶时电压去多少?用预电泳吗?是不是开始时要先大电压激发?还有为什么做胶(6%)时上面插孔处的溶液不易聚合呢?这样上样很不容易,而且易混带,溴芬兰跑着跑着就没有了?
后来换成浓度为20%的聚丙烯酰胺凝胶,插梳子的地方不凝结,无法形成胶孔,下面都凝结的很好,请教一下原因
电泳的时候可能胶浓度太大,我用120v电压才只有十几,功率也达不到,溴芬兰不跑动,?????

好想赶快做完实验啊!
不胜感激,!谢谢谢!
[search]聚丙烯酰胺[/search]
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叶子1983

铜虫 (小有名气)

我的配比是:20%浓度聚丙烯酰胺凝胶-20ml
30% Acr-Bis 13.2ml
5XTBE:4ML
TEMED:7UL
10%AP:140UL
ddH2O:2.5ML
尝试了在高温低温室温,甚至放置过夜,就是胶孔处不聚合,下面的胶凝结的很好,都可以卷起来呢,急急急呢
6楼2008-03-20 23:01:41
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zhoulina_0901

★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):xiexie 欢迎常来
louyiceng(金币+1,VIP+0):鼓励!希望继续关注参与医药区。
你好!
      首先,你要问的是不是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶溶液的浓度比例要看你加的样品中蛋白分子量大概多少,具体的信息有点忘了,有一本书《聚丙烯酰胺凝胶电泳》上有相关内容,你可以看看。(2)跑胶时可以用恒定电压或电泳,我跑电泳时,用的是恒定电流,开始时10mA-15mA,当溴芬蓝跑过浓缩胶和分离胶界面时,将电流20mA-30mA(3)不需要用预电泳(4)做胶时上面插孔处的溶液不易聚合的原因可能是胶的比例不对,或是玻璃不干净。后来换成浓度为20%的聚丙烯酰胺凝胶,插梳子的地方不凝结,无法形成胶孔,下面都凝结的很好,请教一下原因
电泳的时候可能胶浓度太大,我用120v电压才只有十几,功率也达不到,溴芬兰不跑动,可能电阻太大。或是样品盐度过高。
2楼2008-03-20 20:26:00
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zhoulina_0901

以上是我做聚丙烯酰胺电泳得到的一些经验,不知道对你是否有帮助,希望你的实验早日完成
3楼2008-03-20 20:27:36
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xiaoyuan622

金虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来
我以前的时候用6%的浓缩胶也很难聚合,后来延长了聚合的时间(最后到3小时),多加了一点TEMED,结果明显好些了。
今天换了一种浓度的浓缩胶,也聚合不了,准备明天又按上面的方法试试。楼主也可以试试。
4楼2008-03-20 22:54:12
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