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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于聚丙烯酰胺凝胶电泳
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叶子1983

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于聚丙烯酰胺凝胶电泳

最近实验出了一些问题
我做的是核酸DNA的，请问聚丙烯酰胺溶液的浓度比例如何？跑胶时电压去多少？用预电泳吗？是不是开始时要先大电压激发？还有为什么做胶（6%）时上面插孔处的溶液不易聚合呢？这样上样很不容易，而且易混带，溴芬兰跑着跑着就没有了？
后来换成浓度为20%的聚丙烯酰胺凝胶，插梳子的地方不凝结，无法形成胶孔，下面都凝结的很好，请教一下原因
电泳的时候可能胶浓度太大，我用120v电压才只有十几，功率也达不到，溴芬兰不跑动，？？？？？

好想赶快做完实验啊！
不胜感激，！谢谢谢！
[search]聚丙烯酰胺[/search]
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1楼 2008-03-20 17:10:05
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zhoulina_0901

★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):xiexie 欢迎常来
louyiceng(金币+1,VIP+0):鼓励！希望继续关注参与医药区。
你好！
      首先，你要问的是不是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶溶液的浓度比例要看你加的样品中蛋白分子量大概多少，具体的信息有点忘了，有一本书《聚丙烯酰胺凝胶电泳》上有相关内容，你可以看看。（2）跑胶时可以用恒定电压或电泳，我跑电泳时，用的是恒定电流，开始时10mA-15mA,当溴芬蓝跑过浓缩胶和分离胶界面时，将电流20mA-30mA（3）不需要用预电泳（4）做胶时上面插孔处的溶液不易聚合的原因可能是胶的比例不对，或是玻璃不干净。后来换成浓度为20%的聚丙烯酰胺凝胶，插梳子的地方不凝结，无法形成胶孔，下面都凝结的很好，请教一下原因
电泳的时候可能胶浓度太大，我用120v电压才只有十几，功率也达不到，溴芬兰不跑动，可能电阻太大。或是样品盐度过高。
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2楼2008-03-20 20:26:00
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zhoulina_0901

以上是我做聚丙烯酰胺电泳得到的一些经验，不知道对你是否有帮助，希望你的实验早日完成
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3楼2008-03-20 20:27:36
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xiaoyuan622

金虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来
我以前的时候用6%的浓缩胶也很难聚合，后来延长了聚合的时间（最后到3小时），多加了一点TEMED，结果明显好些了。
今天换了一种浓度的浓缩胶，也聚合不了，准备明天又按上面的方法试试。楼主也可以试试。
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4楼2008-03-20 22:54:12
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叶子1983

铜虫 (小有名气)
谢谢啊，我做的是DNA的电泳，不做蛋白质，用的是一块胶，现在关键是插梳子的地方胶体不凝固，其他的地方胶的比例都是一样的，我也混合均匀了，上面是不是接触到空气了呢？如果胶配比不对的话，那么为什么下面的部分都能凝固呢？
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5楼2008-03-20 22:58:10
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叶子1983

铜虫 (小有名气)
我的配比是：20%浓度聚丙烯酰胺凝胶-20ml
30% Acr-Bis 13.2ml
5XTBE:4ML
TEMED:7UL
10%AP:140UL
ddH2O:2.5ML
尝试了在高温低温室温，甚至放置过夜，就是胶孔处不聚合，下面的胶凝结的很好，都可以卷起来呢，急急急呢
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6楼2008-03-20 23:01:41
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来
关于胶不凝结的问题，其实你可以将AP的加入量加倍，如果你是做核酸电泳的话，最好跑一下预电泳，80v一个小时就可以了。
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7楼2008-03-21 10:08:00
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tody4617

木虫 (小有名气)

一根筋家族之独根草
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来
这么说吧,胶凝不了肯定是AP和TEMED浓度不大,建议加到原来的2-3倍,电压问题也不是很严重,有人说用恒流,我觉得恒压也不错,总之一条,电压越低,跑的越细越整齐,我们隔壁就通宵跑,溴芬兰也可能跑出去了,一般会看到的,你自己多注意点吧!
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票子-房子-车子-婆子-儿子
8楼2008-03-21 11:56:13
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叶子1983

铜虫 (小有名气)
谢谢各位啊，今天接受了大家的建议，把AP和TEMED增大了几倍，果然很快聚合，原来还是比例问题，谢谢了啊，实验终于有突破了~-~
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9楼2008-03-21 15:39:48
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yilian

铜虫 (小有名气)
我做的时候TEMED和AP的比例都是大于等于1:10的。聚合的很好
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10楼2008-03-21 17:41:30
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