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zwj526278286

金虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR 已有1人参与

麻烦各位师兄师姐帮我分析一下这个MiRNA 实时定量的图 感激不尽

图注：Figure S3.  (A) Quantitative real-time fluorescence monitoring of the PCR amplification reaction triggered by
different  starting quantity of miR-486-5p. (B) Variance of the CT value as a function of the  logarithmic  starting
quantity of miR-486-5p. Quantitative real-time PCR-CTwas analyzed using CFX software version 2.1 (Bio-Rad,
CA, USA).

RT-PCR
360桌面截图20140529150926.jpg
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坚持
1楼 2014-05-29 15:12:09
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
你要分析什么
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2楼2014-05-30 15:31:34
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zwj526278286

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-30 15:31:34
你要分析什么

这个图是怎么定量RNA的 CT是什么意思？ 后面这张标准曲线图是怎么做的 非常感谢
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坚持
3楼2014-06-04 09:20:22
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若溪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-06-04 16:26:24
标准曲线应该是根据已知浓度的cDNA或拷贝数与其相对应的Ct值得到的，前面是已知浓度的cDNA，图上已经给出了浓度，10的4次方到7次方，根据图1得到每个浓度相对应的Ct值，然后用浓度和Ct值做标准曲线得到第二个图
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没有比脚更长的路，没有比人更高的山
4楼2014-06-04 12:00:24
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zwj526278286

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 若溪 at 2014-06-04 12:00:24
标准曲线应该是根据已知浓度的cDNA或拷贝数与其相对应的Ct值得到的，前面是已知浓度的cDNA，图上已经给出了浓度，10的4次方到7次方，根据图1得到每个浓度相对应的Ct值，然后用浓度和Ct值做标准曲线得到第二个图

这个实在是一点都不懂 呵呵 麻烦再请教一下 Ct是什么意思  拷贝数具体是什么意思 谢谢哦
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坚持
5楼2014-06-08 11:01:12
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zwj526278286

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 若溪 at 2014-06-04 12:00:24
标准曲线应该是根据已知浓度的cDNA或拷贝数与其相对应的Ct值得到的，前面是已知浓度的cDNA，图上已经给出了浓度，10的4次方到7次方，根据图1得到每个浓度相对应的Ct值，然后用浓度和Ct值做标准曲线得到第二个图

比如说 我要分析一种细胞里面某种RNA的量 我应该如何具体的操作呢
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坚持
6楼2014-06-08 11:03:56
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若溪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zwj526278286(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-14 20:58:42
引用回帖:
6楼: Originally posted by zwj526278286 at 2014-06-08 11:03:56
比如说 我要分析一种细胞里面某种RNA的量 我应该如何具体的操作呢...

针对于细胞内某种基因的定量，一般是用相对定量的方法，选取一种管家基因，一般是β-actin,然后是你的目的基因，经过荧光定量PCR得到Ct值，然后根据公式计算出相对表达量
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没有比脚更长的路，没有比人更高的山
7楼2014-06-14 20:00:23
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