24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1605  |  回复: 10
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

richart

金虫 (正式写手)

[交流] T载体连接问题,急求!

我要连接的基因2.6Kb左右,一直连不上T载体(TaKaRa PMD19-T),用的是Pfu扩的基因,转化菌长出的有不少白斑,挑了十几个都是假阳性。请高手指点一下具体怎么操作,连接效率高一些!!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liumikewolf

金虫 (小有名气)

请问如何判断是假阳性的呢?酶切电泳还是PCR?
7楼2008-03-20 09:10:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

傻子

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来
Pfu扩增的PCR产物是没有A尾的,需要再加A才能连T载体。或者PFU扩增结束再用普通Taq 72度延长半小时
1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能,国家免检优质产品。
2楼2008-03-19 18:01:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

totoro一家亲

铜虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 关注,.
楼上说得没错,不过不用那么长时间。
在PCR反应后,补充一点dATP,或者dNTP也行,再加入一点普通Taq酶,72度10分钟就足够了。
我一直这么做的,效果挺好。最长连接过3.6Kb的插入片段
3楼2008-03-19 18:33:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 关注,.
有假阳性说明载体,连接酶都没有问题,感受态也可以。那问题就有可能是Puf酶的产物加A问题。
Puf产物的回收一定干净,不能有干扰Taq酶的东西,
加A产物纯化后快速连接,不要放置,A易掉。
大片段连接实在不行用超感。
慢慢分析别着急,问题会解决的。

[ Last edited by annwt on 2008-3-19 at 19:09 ]
4楼2008-03-19 19:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-03-27 5/250 2026-03-28 08:42 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕,求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 266求调剂 +11 阳阳哇塞 2026-03-27 12/600 2026-03-27 17:56 by yu221
[考研] 287求调剂 +10 land xuxu 2026-03-26 10/500 2026-03-27 15:33 by 帕尔马拉特
[考研] 化学308分求调剂 +8 你好明天你好 2026-03-23 9/450 2026-03-27 14:01 by 杨光于青云
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +5 Ong3 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:24 by goldfish51
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +10 材料学257求调剂 2026-03-23 11/550 2026-03-27 10:13 by YCIT- LHL
[考研] 071000生物学求调剂,初试成绩343 +6 小小甜面团 2026-03-25 6/300 2026-03-26 23:01 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 求调剂 +5 芦lty 2026-03-25 6/300 2026-03-26 20:49 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +6 谷雨上岸 2026-03-23 7/350 2026-03-26 18:55 by 不吃魚的貓
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 10/500 2026-03-26 13:11 by 公瑾逍遥
[考研] 332求调剂 +6 032500 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见