24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1608  |  回复: 10
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

richart

金虫 (正式写手)

[交流] T载体连接问题,急求!

我要连接的基因2.6Kb左右,一直连不上T载体(TaKaRa PMD19-T),用的是Pfu扩的基因,转化菌长出的有不少白斑,挑了十几个都是假阳性。请高手指点一下具体怎么操作,连接效率高一些!!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

totoro一家亲

铜虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 关注,.
楼上说得没错,不过不用那么长时间。
在PCR反应后,补充一点dATP,或者dNTP也行,再加入一点普通Taq酶,72度10分钟就足够了。
我一直这么做的,效果挺好。最长连接过3.6Kb的插入片段
3楼2008-03-19 18:33:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

傻子

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来
Pfu扩增的PCR产物是没有A尾的,需要再加A才能连T载体。或者PFU扩增结束再用普通Taq 72度延长半小时
1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能,国家免检优质产品。
2楼2008-03-19 18:01:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 关注,.
有假阳性说明载体,连接酶都没有问题,感受态也可以。那问题就有可能是Puf酶的产物加A问题。
Puf产物的回收一定干净,不能有干扰Taq酶的东西,
加A产物纯化后快速连接,不要放置,A易掉。
大片段连接实在不行用超感。
慢慢分析别着急,问题会解决的。

[ Last edited by annwt on 2008-3-19 at 19:09 ]
4楼2008-03-19 19:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

用Taq plus 吧,省点事。
细推物理须行乐。
5楼2008-03-19 22:10:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 数一英一271专硕(085401)求调剂,可跨 +4 前行必有光 2026-03-28 5/250 2026-03-28 11:27 by xuxiang
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 295求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 04:04 by fmesaito
[考研] 266求调剂 +11 阳阳哇塞 2026-03-27 12/600 2026-03-27 17:56 by yu221
[考博] 26申博 +3 加油冲啊! 2026-03-26 3/150 2026-03-27 15:38 by cls512
[考研] 283求调剂(080500) +4 A child 2026-03-27 4/200 2026-03-27 15:34 by XPU李庆
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 316求调剂 +5 江辞666 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:08 by hypershenger
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 总分293求调剂 +6 加一一九 2026-03-25 8/400 2026-03-26 13:30 by yujianx
[考研] 332求调剂 +6 032500 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见