应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » T载体连接问题，急求！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1603  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

richart

金虫 (正式写手)

[交流] T载体连接问题，急求！

我要连接的基因2.6Kb左右，一直连不上T载体（TaKaRa PMD19-T），用的是Pfu扩的基因，转化菌长出的有不少白斑，挑了十几个都是假阳性。请高手指点一下具体怎么操作，连接效率高一些！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-03-19 15:48:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王者之心

爱莫能助    跟着学习一下
赞一下 回复此楼
10楼2008-06-09 23:41:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

傻子

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来
Pfu扩增的PCR产物是没有A尾的，需要再加A才能连T载体。或者PFU扩增结束再用普通Taq 72度延长半小时
赞一下(10人) 回复此楼
1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能，国家免检优质产品。
2楼2008-03-19 18:01:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

totoro一家亲

铜虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 关注,.
楼上说得没错，不过不用那么长时间。
在PCR反应后，补充一点dATP，或者dNTP也行，再加入一点普通Taq酶，72度10分钟就足够了。
我一直这么做的，效果挺好。最长连接过3.6Kb的插入片段
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-03-19 18:33:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 关注,.
有假阳性说明载体，连接酶都没有问题，感受态也可以。那问题就有可能是Puf酶的产物加A问题。
Puf产物的回收一定干净，不能有干扰Taq酶的东西，
加A产物纯化后快速连接，不要放置，A易掉。
大片段连接实在不行用超感。
慢慢分析别着急，问题会解决的。

[ Last edited by annwt on 2008-3-19 at 19:09 ]
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-03-19 19:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +9 vv迷 2026-03-22 9/450 2026-03-27 15:59 by 不吃魚的貓
[考研] 322求调剂 +4 我真的很想学习 2026-03-23 4/200 2026-03-27 13:51 by 杨杨杨紫
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 333求调剂 +7 87639 2026-03-21 12/600 2026-03-26 22:08 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 329求调剂 +5 1() 2026-03-22 5/250 2026-03-26 20:40 by fmesaito
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 0856求调剂 +8 zhn03 2026-03-25 9/450 2026-03-26 13:42 by zzll406
[考研] 332求调剂 +6 032500 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭