| 查看: 717 | 回复: 1 | |||
[交流]
兄弟姐妹们来帮我看下根据这几个线索能否确定一个pcr产物是否为我要的片段
|
最近在做RACE，根据保守序列设计了巢式引物A和B，与试剂盒带的UPM和NUP进行巢式pcr，pcr程序设计的降落pcr。第一次pcr以引物A和UPM扩增，电泳检测无结果，以B和NUP进行巢式扩增，出来两条带，一条520左右，一条425。让生工克隆测序，520这条带上，找不到我的两对引物，作为3'末端，也没有polyA尾巴。（1）而425的这个片段，能找的我的两对引物B和NUP，且在序列两端，（2）该片段有polyA尾巴，（3）而且和我得保守序列有160bp的100%的重叠，再设计引物时，理论上就是160bp的重叠，该特征符合。（4）再设计引物时，B和NUP之间没有引物二聚体，引物B评分100。（5）pcr用的生工的MIX，所以具体的tap酶啊，Mg离子的浓度都不清楚。但是在对这段基因进行blast的时候，没有任何的相似结果，所以很纠结，根据上面的五个线索，该片段是否是我要的目的片段，又会不会是扩出来的非特异性条带，我很不明白为什么会出现非特异性。附上3‘RACE的pcr图。 3race ifn-1-5-18.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有229人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【求助/交流】大家看看这对引物（高G+C含量）的退火温度设多少合适
已经有12人回复
2楼2014-05-28 11:26:01
