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极道始之魔

银虫 (小有名气)

[求助] northern bloting

最近做northern实验,我用的是点杂交的方法。RNA样品是是已经降解了的,要做它的种属鉴定。设计了6个生物素标记的探针,一直坐不出结果。尼龙膜上没有明显的斑点,有时只有很小的一颗,所以不能确定。后来做了几次阳性对照,直接把探针点在膜上,发现有很明显的杂交斑点,所以操作不存在问题。目前的问题就是RNA样品和探针杂交不上。除了换探针外,目前还存在哪些问题?
有以下疑惑
1.交杂温度,这个说是要慢慢摸索的,说是比TM值低20摄氏度左右,这个没问题

2。RNA样品需要怎么处理啊,有试过95摄氏度5min,再放冰上,也试过加甲醛等变性剂

3.试过跑电泳,转膜没成功,这个可能样品量太少了
,求助各位道友
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