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极道始之魔银虫 (小有名气)
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[求助]
northern bloting
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最近做northern实验，我用的是点杂交的方法。RNA样品是是已经降解了的，要做它的种属鉴定。设计了6个生物素标记的探针，一直坐不出结果。尼龙膜上没有明显的斑点，有时只有很小的一颗，所以不能确定。后来做了几次阳性对照，直接把探针点在膜上，发现有很明显的杂交斑点，所以操作不存在问题。目前的问题就是RNA样品和探针杂交不上。除了换探针外，目前还存在哪些问题？ 有以下疑惑 1.交杂温度，这个说是要慢慢摸索的，说是比TM值低20摄氏度左右，这个没问题 2。RNA样品需要怎么处理啊，有试过95摄氏度5min，再放冰上，也试过加甲醛等变性剂 3.试过跑电泳，转膜没成功，这个可能样品量太少了 ，求助各位道友 |
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