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园园补补铁虫 (小有名气)
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[求助]
为什么提取RNA时出现一坨白色沉淀 已有13人参与
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| 提取RNA快一年时间了，之前提取效果一直很好，可是近两次却出现了出题：用Trizol提取RNA，加入异丙醇离心后就会出现一坨白色沉淀，用75%乙醇洗涤沉淀离心后依旧有很明显的白色沉淀，检测的A260/A280比值低于1.8，A260/A230比值低于2.0，（之前的实验没有出现过很明显的白色沉淀，而且A260/A280和A260/A230比值都很正常）。。。很困惑，实验没办法进行了。。。 |
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伤不起是什么个情况嘛？难道白色沉淀不是RNA
？越是没有表示越纯？瞬间凌乱了。。。。
反正我前三个管子在弃上清时候发现有一坨白色沉淀，干燥时候没有及时观察，干燥的久了一些，我一看，里面东西没有了，变透明了，吓了我一跳，目测这三管不大好溶解啊，
后面几组就及时溶解了，后天跑PCR，希望结果良好。
27楼2014-06-14 11:44:08
飞约疯人院
专家顾问 (著名写手)
科学怪人
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 19:04:44
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楼主，请仔细看下我们的步骤： 按照TRizol一步法制备总RNA，其步骤简述如下：取膜荚黄芪的叶片500 mg，于液氮预冷的研钵中，液氮速冻后充分研磨成粉末，加入到加有5 mL TRizol的15 mL离心管中，混匀，室温放置5 min，使其充分裂解12 000 rpm，离心5 min，弃沉淀。加入1mL氯仿，震荡混和均匀后放于冰上15 min，于4 ℃，12000 rpm 离心15min。取上清液到新的离心管中，加入等量体积异丙醇，颠倒混合均匀，-20℃ 放置20 min以上，4 ℃，12 000 rpm离心10 min。去上清，加入5 mL 75 %冰乙醇，悬浮沉淀，4℃，12 000 rpm离心5 min，去上清，重复2次。在室温阴凉处空气干燥或真空干燥RNA沉淀。加入50 μL DEPC H2O溶解RNA，将抽提好的总RNA 保存于-70 ℃冰箱中。 |
2楼2014-05-27 14:43:40
Neo2000
木虫 (著名写手)
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3楼2014-05-27 15:13:23
园园补补
铁虫 (小有名气)
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4楼2014-05-28 09:34:37
