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ola_119

新虫 (初入文坛)

[求助] 要在扫描电镜下观察大肠杆菌的外观形貌,如何进行样品前处理 已有2人参与

我想观察经过抗菌剂处理后大肠杆菌的外观形貌,主要是看外观是否完好,还是发生了形变甚至破裂,请问在用扫描电镜观察前,如何对大肠杆菌进行处理,谢谢了
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chengjg

木虫 (正式写手)

dllchina: 告诉之后我再给啊~~ 2014-06-10 08:39:33
把20个金币都送我告诉你 嘿嘿
2楼2014-06-10 08:27:35
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chengjg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

首先要离心把培养基去掉,然后用PBS缓冲液反复冲洗细胞三次离心,然后用2.5%的戊二醛固定2小时以上,再用PBS缓冲液冲洗一次。然后用30-100%的乙醇梯度脱水。梯度要小啊5-10一梯度,最后再用叔丁醇反复冲洗3次以上,然后涂片。4摄氏度放置过夜,然后真空冷冻干燥。之后就可以喷金做电镜了。处理一定按我说的一步步来不能偷懒啊。否则细胞就会坍陷。其实应该要你50金币 哈哈
3楼2014-06-10 09:01:23
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chengjg

木虫 (正式写手)

怎么还不发金币啊!
4楼2014-07-28 20:52:39
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liuboeo

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我的经验是,不用PBS,直接用无菌水清洗一两遍,动作一定要快,离心不用太久,随后立即加入2.5%戊二醛固定2h,随后酒精脱水,临界点干燥(一定要做),这样避免了很多清洗步骤,效果比较好
5楼2014-07-28 22:25:45
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juandreams

新虫 (初入文坛)

各位大侠,什么是临界点干燥?

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-05-10 17:10:53
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aqingya

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chengjg at 2014-06-10 06:01:23
首先要离心把培养基去掉,然后用PBS缓冲液反复冲洗细胞三次离心,然后用2.5%的戊二醛固定2小时以上,再用PBS缓冲液冲洗一次。然后用30-100%的乙醇梯度脱水。梯度要小啊5-10一梯度,最后再用叔丁醇反复冲洗3次以上, ...

想问下具体的4摄氏度倒置过夜就可以了吗?我看有的是要-80度?
7楼2021-03-09 12:42:34
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