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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 要在扫描电镜下观察大肠杆菌的外观形貌，如何进行样品前处理
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ola_119

新虫 (初入文坛)

[求助] 要在扫描电镜下观察大肠杆菌的外观形貌，如何进行样品前处理 已有2人参与

我想观察经过抗菌剂处理后大肠杆菌的外观形貌，主要是看外观是否完好，还是发生了形变甚至破裂，请问在用扫描电镜观察前，如何对大肠杆菌进行处理，谢谢了
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1楼 2014-05-27 12:14:18
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chengjg

木虫 (正式写手)
dllchina: 告诉之后我再给啊~~ 2014-06-10 08:39:33
把20个金币都送我告诉你 嘿嘿
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2楼2014-06-10 08:27:35
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chengjg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

首先要离心把培养基去掉，然后用PBS缓冲液反复冲洗细胞三次离心，然后用2.5%的戊二醛固定2小时以上，再用PBS缓冲液冲洗一次。然后用30-100%的乙醇梯度脱水。梯度要小啊5-10一梯度，最后再用叔丁醇反复冲洗3次以上，然后涂片。4摄氏度放置过夜，然后真空冷冻干燥。之后就可以喷金做电镜了。处理一定按我说的一步步来不能偷懒啊。否则细胞就会坍陷。其实应该要你50金币 哈哈
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3楼2014-06-10 09:01:23
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chengjg

木虫 (正式写手)
怎么还不发金币啊！
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4楼2014-07-28 20:52:39
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liuboeo

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我的经验是，不用PBS，直接用无菌水清洗一两遍，动作一定要快，离心不用太久，随后立即加入2.5%戊二醛固定2h，随后酒精脱水，临界点干燥（一定要做），这样避免了很多清洗步骤，效果比较好
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5楼2014-07-28 22:25:45
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juandreams

新虫 (初入文坛)
各位大侠，什么是临界点干燥？

发自小木虫IOS客户端
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6楼2016-05-10 17:10:53
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aqingya

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chengjg at 2014-06-10 06:01:23
首先要离心把培养基去掉，然后用PBS缓冲液反复冲洗细胞三次离心，然后用2.5%的戊二醛固定2小时以上，再用PBS缓冲液冲洗一次。然后用30-100%的乙醇梯度脱水。梯度要小啊5-10一梯度，最后再用叔丁醇反复冲洗3次以上， ...

想问下具体的4摄氏度倒置过夜就可以了吗？我看有的是要-80度？
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7楼2021-03-09 12:42:34
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