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lmc2537

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9楼: Originally posted by 白菜吃虫 at 2014-05-29 10:46:58
我们作为客户买到的TA克隆载体，肯定都是线性化的。
阴性对照指的是线性化的TA载体片段在加入连接酶以后进行连接转化涂板，理论上应该没有菌落，如果有菌落就说明存在环状质粒。这个质粒的来源可能是原线性化片段 ...

谢谢你的回复！如果做阴性对照，是否就是用自连的载体？或者说没有连目的DNA但在涂板过程中长出的菌落抽取的质粒。

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11楼2014-05-30 09:28:23

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白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lmc2537: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-05-30 15:03:03
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-06-13 11:19:46

引用回帖:

11楼: Originally posted by lmc2537 at 2014-05-30 09:28:23
谢谢你的回复！如果做阴性对照，是否就是用自连的载体？或者说没有连目的DNA但在涂板过程中长出的菌落抽取的质粒。...

rol:我觉得你可能是没弄清楚做阴性对照的目的是啥。不加入任何DNA，只有细菌的，目的是检测抗生素是否有效；加入只有T载体的线性化片段，目的是检测载体的线性化情况，你的目的片段板上是否长了假阳性。
阴性对照是直接用你买来的T载体线性片段，操作上，除了不加入自己的目的DNA，其它操作与加入目的DNA的完全一样。理论上不应该长菌；如果长了，就说明线性化片段里面混有环状的DNA，说明你的目的片段板上可能有假阳性。
阴性对照绝对不能转环状的质粒，那就不叫阴性对照了，就成阳性对照了。
话说我从来不做阴性对照，阳性对照什么的，只要有我要的目的基因就好，弄那么多也没用。
也不知道我说清楚了没有。

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12楼2014-05-30 12:44:55

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lmc2537

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12楼: Originally posted by 白菜吃虫 at 2014-05-30 12:44:55
rol:我觉得你可能是没弄清楚做阴性对照的目的是啥。不加入任何DNA，只有细菌的，目的是检测抗生素是否有效；加入只有T载体的线性化片段，目的是检测载体的线性化情况，你的目的片段板上是否长了假阳性。
阴性对照 ...

我大致明白你的意思了，可能我没表达清楚，不好意思，我说的阴性对照是指将来转染细胞的时候用来做对照的，即没有连DNA的质粒载体转染到293T细胞里面。

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13楼2014-05-30 15:05:51

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