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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因克隆
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

[求助] 基因克隆 已有4人参与

我需要克隆一个片段，大小是240bp左右，我要克隆这个基因的cds区去构建载体做过表达，请问设计引物的时候是不是要从起始密码子也就是5端的碱基处，然后从3端末尾处也得有引物系列，也就是说这个引物是不是要扩增大小是基因原长也就是240bp？谢谢
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1楼 2014-05-24 11:57:43
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-24 20:42:33
我一般也就是在起始密码子处和终止密码子处设计引物的。设计引物的时候还要考虑加kozak序列和读框的问题（跟你的载体有关）
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4楼2014-05-24 13:13:41
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wwlygy

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-24 12:42:50
至少要把CDS区包含，也可以大一点！但不宜大太多，几十bp以内吧！这么小估计一次PCR就完活了！

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2楼2014-05-24 12:08:18
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wwlygy

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

亲有问题再问我哦，我会这个！！！

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-05-24 13:07:02
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红卫大兵

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wwlygy at 2014-05-24 13:07:02
亲有问题再问我哦，我会这个！！！

不过我找到的序列正好从起始密码子atg开始的，然后最后一个碱基也是外显子，所以要克隆这个基因必须要在起始和结尾设计引物？
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5楼2014-05-24 13:16:13
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