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will-jiang

金虫 (初入文坛)

[求助] 细胞培养 已有2人参与

最近在培养肿瘤细胞,一般3天换一次培养基,6天传代,加双抗,一直都比较稳定。可是这次在准备再次换液的时候发现培养基变浑浊(之前一天晚上还是澄清的),一直比较注意染菌的问题,所以操作前都经过各种灭菌处理,而且一直观察培养基颜色的变化,48小时候变成浅红色,应该不是染菌的问题(染菌应该短时间内颜色变浅)。所以请有经验的前辈指导一下,这次细胞在第三天不贴壁生长是不是因为细胞浓度过大(显微镜下观察细胞抱团现象比较严重),应该在前一天传代而不是再等一天? 或则还有可能是什么其他原因?感谢赐教!
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yipan

铜虫 (职业作家)


【答案】应助回帖

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
will-jiang: 金币+12, ★有帮助 2014-05-25 15:10:54
支原体是一种大小仅为0.2~0.3 μm,无细胞壁,可透过一般过滤膜(0.22-0.45 μm)的原核生物,在细胞培养过程中,支原体感染发生率达到63%,因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。多篇文献研究表明:当细胞(特别是传代细胞)被支原体污染后,细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变,而细胞的生长率一般并未发生显著的影响,因而细胞被支原体污染一般难以察觉。
    吉锐生物根据自身的经验开发了MycoplasmaOUT™,用于解决因支原体污染而导致细胞污染或状态下降的问题,同时其对于见的革兰氏阴性和阳性菌也有一定的清除作用。从而确保研究人员的研究结果真实、可信。
2楼2014-05-23 13:16:48
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坐山观云

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与,应助指数 +1
will-jiang: 金币+60, ★★★★★最佳答案 2014-05-25 15:11:06
那种肿瘤细胞呀?
    是不是染菌可以用血平皿检查一下就知道啦!
    不是染菌的话就你说的细胞浓度太大了,肿瘤细胞生长应该很快的;要嘛就是加培养液温度太低,细胞操作外面时间太长,细胞死后碎片太多,不是污染就好办!
执着,是一种无需理由的可爱!
3楼2014-05-23 16:01:47
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will-jiang

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 坐山观云 at 2014-05-23 16:01:47
那种肿瘤细胞呀?
    是不是染菌可以用血平皿检查一下就知道啦!
    不是染菌的话就你说的细胞浓度太大了,肿瘤细胞生长应该很快的;要嘛就是加培养液温度太低,细胞操作外面时间太长,细胞死后碎片太多,不是污 ...

多谢。 如果说是细胞浓度太大了会导致全部细胞不贴壁么?
4楼2014-05-24 05:33:08
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坐山观云

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by will-jiang at 2014-05-24 05:33:08
多谢。 如果说是细胞浓度太大了会导致全部细胞不贴壁么?...

我觉得贴壁与细胞浓度不大,与细胞类型和体外培养时间有关;大部分细胞都会贴壁,但随着体外培养时间变长,细胞形态发生改变就可以悬浮生长,但有些贴壁细胞像DC,时间长了就只能用消化酶,吹都吹不掉。
执着,是一种无需理由的可爱!
5楼2014-05-26 11:31:40
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燕绮

银虫 (正式写手)

你是这次的一直没贴壁,还是前两天贴了今天看到的没贴壁都是漂浮的细胞团?
6楼2014-05-26 20:48:31
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