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银虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2560.3
帖子: 533
在线: 170.5小时
虫号: 1519871
注册: 2011-12-02
性别: GG
专业: 微生物遗传育种学

[求助] 求助大肠宿主

各位亲们，小弟最近实验受阻，眼看马上就要毕业，心中甚是焦虑啊！！！！！

现在实验想尝试大肠杆菌C41(DE3),想好心人儿不吝施舍一些，我可以和您用别的来交换的，谢谢啊，太谢谢啦！！！！！

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1楼2014-05-21 15:56:55

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新虫 (初入文坛)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 3
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虫号: 3231987
注册: 2014-05-25

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
linkv8: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-26 19:34:45

1. BL21 is different from BL21 DE3, which has lac control to prevent leakage before IPTG induction.
2. Try use pET17 or earlier version and pMal-c5x.
3. Cell: C41 or rosetta Gammii 2
4. For expression: proetein-pET17 in C41. using very riched media,
prepare 10ul overnight culture and add to 500ml media.
start your growth on Friday at room temperature or even low temp.
harvest you pellets on Monday.
For growth under 4C, 1 week.
DON'T ADD ANY IPTG and NO inductioin.

The whole idea is to use the lac leakage to expression the protein with proper fold.

Good luck