应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何把大肠杆菌中的质粒转化到农杆菌中
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 1181  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

lilyt

铜虫 (小有名气)

[交流] 如何把大肠杆菌中的质粒转化到农杆菌中

最近做实验，刚刚接触这方面的东西，还不是很熟，问了周边的人，也没有做过，想把大肠杆菌中的质粒转化到农杆菌中，还请各位高手指教啊！

[ Last edited by lilyt on 2008-3-18 at 20:33 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-03-17 10:17:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
农杆菌感受态细胞的制备
取-70℃保存的农杆菌于含50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养。
挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。
取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中，28℃220rpm振荡培养至OD600=0.5。
转入无菌离心管，5000rpm离心5min,去上清液。
加入10ml预冷的0.1M的CaCl2溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置20min。4℃5000rpm离心5min，去上清。
加入4ml预冷的含15%甘油的0.1M的CaCl2溶液，轻轻悬浮。
农杆菌悬浮液分装于无菌Eppendorf管中，每管200μl冻存于-70℃。
转化农杆菌
取1μg左右的质粒DNA加入到200ml农杆菌感受态细胞中，混匀后，冰浴30min，-70℃放置10min 。再在37℃水浴5min或42℃水浴1min，接着冰浴2min，加入800mlYM液体培养基28℃，175rpm摇培3hr后涂在含50μg/ml Kanamycin的YM平板上。28℃培养到形成单菌落。
赞一下(10人) 回复此楼
细推物理须行乐。
2楼2008-03-17 10:33:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来
应该是构建表达载体，转基因。
1，应首先了解你的载体上的选择基因和相关的特性。
2，需要那种农杆菌？别搞错了，不同植物转化用不同的，因为农杆菌对植物有一定毒害作用。
3，转化比大肠杆菌复杂些，农杆菌生长也慢，转化完我还遇到过假阳性，所以一定好好鉴定。
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-03-17 10:58:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Kiddy

金虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来
先把大肠杆菌的质粒提出来,再电击转入农杆菌中,你要制备感受态农杆菌!具体过程你就在网上查一查
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-03-17 11:48:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilyt

铜虫 (小有名气)
谢谢以上3位的解答！
赞一下 回复此楼
5楼2008-03-17 14:15:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilyt

铜虫 (小有名气)
我用过一个农杆菌菌株老是感不上外植体，所以想换换菌株再做！
赞一下 回复此楼
6楼2008-03-17 15:39:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来
应该先克隆到穿梭载体上吧，然后电转。
赞一下(10人) 回复此楼
金币是赌出来的
7楼2008-03-18 13:43:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lilyt 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 26申博自荐 +5 whh869393 2026-03-24 5/250 2026-03-29 16:58 by nemohyx
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +15 稻妻小编 2026-03-26 15/750 2026-03-29 15:39 by Serene1974
[考研] 299求调剂 +9 15188958825 2026-03-25 9/450 2026-03-29 14:16 by wxiongid
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +7 @taotao 2026-03-29 7/350 2026-03-29 12:03 by longlotian
[考研] 调剂求院校招收 +6 鹤鲸鸽 2026-03-28 6/300 2026-03-29 08:15 by fmesaito
[硕博家园] 求调剂 有机化学考研356分 +3 Nadiums 2026-03-25 4/200 2026-03-29 00:50 by 544594351
[考研] 343求调剂 +5 爱羁绊 2026-03-28 5/250 2026-03-28 20:53 by 唐沐儿
[考研] 083000学硕274求调剂 +8 Li李鱼 2026-03-26 8/400 2026-03-28 20:33 by 加油向未来啊
[考研] 071000生物学求调剂，初试成绩343 +7 小小甜面团 2026-03-25 7/350 2026-03-28 20:25 by 唐沐儿
[考研] 295材料工程专硕求调剂 +7 1428151015 2026-03-27 7/350 2026-03-28 19:58 by S240
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 312求调剂 +9 上岸吧ZJY 2026-03-22 13/650 2026-03-27 11:24 by sanrepian
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +4 柳溪边 2026-03-26 4/200 2026-03-26 21:14 by XPU李庆
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭