应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于半定量PCR的内参调节问题
52/1返回列表
查看: 3571  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

[求助] 关于半定量PCR的内参调节问题 已有5人参与

最近在做半定量PCR，确定了内参基因的循环数，但是内参基因额亮度一直不好调整，需要调整模板CDNA的浓度，但是工作量太大了，我想问一下有没有哪位大侠知道如何快速调整CDNA的模板量，从而使得内参基因在选定的扩增循环数内亮度相同呢？不胜感激。@西瓜@biostar2009
回复此楼

» 猜你喜欢
生命不息奋斗不止
1楼 2014-05-18 17:27:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
冷雁孤旅: 金币+1, ★有帮助 2014-05-20 16:15:39
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2014-05-18 23:27:18
最开始提取的RNA，我测了RNA的浓度，浓度参差不齐，不好调整，我就直接都取了7ulRNA反转，现在半定量的内参亮度也不同，现在可i以测定反转录的CDNA的浓度 来补救么？我想要是CDNA的浓度相同的话，那么内参的扩增亮 ...

测cDNA浓度是无法做到的，建议做qPCR

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
13楼2014-05-19 17:06:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冷雁孤旅(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-18 19:52:29
冷雁孤旅: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2014-05-18 23:27:27
在你做逆转录是用相同量的RNA做逆转录，然后取相同体积的cDNA做内参，一般会齐
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-05-18 18:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冷雁孤旅: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2014-05-18 23:30:19
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-19 20:17:26
1. 提取的RNA要测定浓度，然后稀释到一致的浓度
2. 反转录用等量的RNA（之所以稀释RNA，是为了在反转录时减小加样误差）
3. PCR时取等量的cDNA

要注意PCR仪的扩增效率，如果PCR仪各孔之间的效率差很多的话，需要先校正PCR仪。
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-18 20:07:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-18 18:09:41
在你做逆转录是用相同量的RNA做逆转录，然后取相同体积的cDNA做内参，一般会齐

最开始提取的RNA，我测了RNA的浓度，浓度参差不齐，不好调整，我就直接都取了7ulRNA反转，现在半定量的内参亮度也不同，现在可i以测定反转录的CDNA的浓度 来补救么？我想要是CDNA的浓度相同的话，那么内参的扩增亮度是否也相同呢
赞一下 回复此楼
生命不息奋斗不止
4楼2014-05-18 23:27:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭