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xiaoyur

金虫 (著名写手)

[交流] 请教,转基因的问题

我克隆了一个基因片段,全基因序列中有一内含子
想把这个基因转移到蔬菜作物上
载体PBI121,片段1123bp
不知道内含子会不会影响基因的表达,蛋白的活性?
如果有影响的话,怎么把内含子去掉?
谢谢
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annwt

木虫 (正式写手)

内含子也许有增强基因表达的功能,也许还有其他功能,反正内含子不是没有功能的junk DNA,这是目前对内含子的普遍认同的看法。
但是,你的内含子究竟有何功能你不确定,所以转进去容易,解释难,不好说是基因还是内含子影响生物的性状,解二元一次方程比一元一次难多了,所以应该去掉内含子,为将来的后期结果分析提供明确的原因。
去掉内含子容易,从cDNA扩就行。如果从基因组DNA,则需要合成两对引物,拼接PCR就可以。

[ Last edited by annwt on 2008-3-18 at 13:17 ]
11楼2008-03-18 11:58:32
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

你的基因是真核微生物源的基因吗?你最好把它去掉,因为从稳定性、载体连接效率、转化效率等等考虑,长片断不如短片断。最好做反转录PCR,得到cDNA再克隆表达。
细推物理须行乐。
2楼2008-03-15 15:13:15
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xiaoyur

金虫 (著名写手)

真核生物的
本想着扩出来就完事了,可以进行突飞猛进了
没想到整出个内含子来
哎。。。。。。。
谢谢楼上的
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3楼2008-03-15 16:49:09
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

做试验可不能着急呀,越着急越出乱子!!!
细推物理须行乐。
4楼2008-03-15 17:11:01
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