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忘记将来

木虫 (正式写手)

应助: 8 (幼儿园)
金币: 2511.3
散金: 506
红花: 2
帖子: 473
在线: 232.9小时
虫号: 815220
注册: 2009-07-24
专业: 生物化学

[求助] 荧光定量PCR实验求助已有4人参与

刚刚学习做荧光定量PCR，虫虫们用那个公司的荧光定量mix的多？
做标准曲线的溶度已知的DNA 是什么？买的试剂盒吗？标准曲线是每次试验都要做一次吗？
做荧光定量的模板必须是cDNA吗、？
大咖们给出来指导一下呀，不胜感激！

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1楼 2014-05-15 15:03:11

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银虫 (初入文坛)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 353.1
红花: 2
帖子: 35
在线: 21.9小时
虫号: 2852803
注册: 2013-12-06
性别: GG
专业: 中药制剂

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
忘记将来(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-19 20:27:01
忘记将来: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2014-05-20 11:12:40

1）试剂方面，推荐美国GeneCopoeia的All-in-One™系列，从RNA抽提到检测，很全，照着说明书操作就行了，有问题找技术支持，价格还行,这家试剂是基于SYBR Green 1 染料法研发的。
2）严格来讲如果实验条件不一样，那么都应该做标准曲线。
3）做荧光定量的模板取决于你要检测什么，检测总DNA的拷贝数使用DNA，检测某基因的表达水平使用cDNA.
4)绝对定量的目的是测定目的基因在样本中的分子数目，即通常所说的拷贝数。相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例，而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。
希望我的回答能帮助你。