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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酶切问题
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ruchang2013

铁虫 (初入文坛)

[求助] 酶切问题 已有2人参与

酶切体系20μL，加酶0.5μL,够吗？酶切3小时应该可以了吧，酶切最多多长时间？我是酶切体系约250μL，加了10μL的酶，25μLbuffer，时间近4小时，怎么还是切出2条带，质粒本身4kb,5kb的marker，在3kb~5kb,2kb~3kb,都有条带。我平时是按20μL/0.5μL酶，岂不是这样的比例更是切不出来！
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1楼 2014-05-13 18:01:16
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906394648

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-13 19:49:14
ruchang2013: 金币+5, ★有帮助 2014-05-14 14:39:01
建议你好好看看酶的使用说明书，我觉的你的体系有问题，还跟你的质粒浓度有关系，但我建议在你不清楚的情况下，仔细看看说明书，一定会有答案的。
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2楼2014-05-13 19:47:01
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
单酶切出两条带只能说明你的质粒上有两个切割位点，我一般20ul体系加1ul的酶，模板1-2ug，37度4个小时都没问题，酶是Takara的。
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大家相互帮助哈
3楼2014-05-13 20:39:12
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