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ruchang2013

铁虫 (初入文坛)

[求助] 酶切问题 已有2人参与

酶切体系20μL,加酶0.5μL,够吗?酶切3小时应该可以了吧,酶切最多多长时间?我是酶切体系约250μL,加了10μL的酶,25μLbuffer,时间近4小时,怎么还是切出2条带,质粒本身4kb,5kb的marker,在3kb~5kb,2kb~3kb,都有条带。我平时是按20μL/0.5μL酶,岂不是这样的比例更是切不出来!
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906394648

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-13 19:49:14
ruchang2013: 金币+5, 有帮助 2014-05-14 14:39:01
建议你好好看看酶的使用说明书,我觉的你的体系有问题,还跟你的质粒浓度有关系,但我建议在你不清楚的情况下,仔细看看说明书,一定会有答案的。
2楼2014-05-13 19:47:01
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
单酶切出两条带只能说明你的质粒上有两个切割位点,我一般20ul体系加1ul的酶,模板1-2ug,37度4个小时都没问题,酶是Takara的。
大家相互帮助哈
3楼2014-05-13 20:39:12
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