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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Exonuclease Ⅲ 可以用来切RNA 得到guanosine 5'-monophosphate吗
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jurongv

新虫 (初入文坛)

[求助] Exonuclease Ⅲ 可以用来切RNA 得到guanosine 5'-monophosphate吗

老板要我买一个可以用来切RNA得到有鲜味的guanosine 5'-monophosphate的核酸外切酶,我是学纯化学的孩子好么...生物的东西真心不记得了,求各位前辈指教:我现在找到一个Exonuclease Ⅲ (E. coli ),他们网站上的介绍是3'到5'的顺序,但是我不太明白这个顺序切出来是5'的核苷酸吗 (必须要留下5'的才可以,切反了我就完蛋了,花上千块买了没用的药品肯定被骂死...当然老板自己好像也不是很确定,我问他的时候他就叫我查文献make sure,我也没找到文献嘤嘤...)
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1楼 2014-05-12 10:50:45
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-05-13 08:26:54
jurongv: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-05-13 17:07:59
你这个根本不需要用酶切~~~
RNA用碱水解之后，产生的就是5‘-monophosphate，2‘/3’ hydroxyl 的NMP产物，你只需要再用HPLC之类的方法纯化GMP即可。
据我所知，目前商业化的exonuclease，还没有针对RNA的。
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2楼2014-05-12 22:04:15
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-05-13 08:26:57
你去搞点食品添加剂，呈味核苷酸二钠，那个里面主要就是GMP和IMP，都不用切了，直接分离GMP就好啦？
我觉得GMP应该直接也有卖的！
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3楼2014-05-12 22:09:46
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jurongv

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-05-12 22:04:15
你这个根本不需要用酶切~~~
RNA用碱水解之后，产生的就是5‘-monophosphate，2‘/3’ hydroxyl 的NMP产物，你只需要再用HPLC之类的方法纯化GMP即可。
据我所知，目前商业化的exonuclease，还没有针对RNA的。

太谢谢了~可以给具体一点的条件么,我看到碱水解的话不好控制程度啊,会变成核糖\碱基\磷酸这样呢
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4楼2014-05-13 17:06:10
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jurongv

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-05-12 22:09:46
你去搞点食品添加剂，呈味核苷酸二钠，那个里面主要就是GMP和IMP，都不用切了，直接分离GMP就好啦？
我觉得GMP应该直接也有卖的！

我就是要在发酵过的渣里面提核苷酸,类似废物利用这样
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5楼2014-05-13 17:07:05
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
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4楼: Originally posted by jurongv at 2014-05-13 17:06:10
太谢谢了~可以给具体一点的条件么,我看到碱水解的话不好控制程度啊,会变成核糖\碱基\磷酸这样呢...

非常抱歉，这个地方我说错了，已经通知版主处理，但是一直没见处理。。。
碱水解得不到你想要的产物，
碱水解的产物是5-‘hydroxyl， 2’/3‘- monophoshpate
从来没有记反过的。。。昨晚可能神经搭错了。。。

适合你这个的酶，估计只有RNaseP，这个东西是和核酶，很不常用。
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6楼2014-05-13 17:19:33
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jurongv

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-05-13 17:19:33
非常抱歉，这个地方我说错了，已经通知版主处理，但是一直没见处理。。。
碱水解得不到你想要的产物，
碱水解的产物是5-‘hydroxyl， 2’/3‘- monophoshpate
从来没有记反过的。。。昨晚可能神经搭错了。。。
...

哦哦,版主把我的帖子弄到不能回复了,我又叫他弄回来了,还是谢谢你哈,之前完全没想到可以用水解酶,因为你提到了,我查了一下5'-磷酸二酯酶可以水解成我要的产物,而且还很便宜
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7楼2014-05-13 22:40:56
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
呀，对，忘了PDE1
Snake venom phosphodiesterase
这个也是5‘ phosphate的！~
这个东西也是很少用到了，很多公司都没有，你在哪买很便宜？
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8楼2014-05-13 22:48:29
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jurongv

新虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-05-13 22:48:29
呀，对，忘了PDE1
Snake venom phosphodiesterase
这个也是5‘ phosphate的！~
这个东西也是很少用到了，很多公司都没有，你在哪买很便宜？

我找的就是5'-PDE哦,不是很分得清1234啊,你说的PDE1是我说的那个吗,国外的公司没找到就碰运气百度了一下,这个25g180块http://www.foodmate.net/sell/show-238826.html, 还有阿里巴巴上有1000块1kg的,都是食品级的,但是我觉得应该已经够用了,因为我就是想最后弄成增味剂
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9楼2014-05-13 23:27:32
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jurongv at 2014-05-13 23:27:32
我找的就是5'-PDE哦,不是很分得清1234啊,你说的PDE1是我说的那个吗,国外的公司没找到就碰运气百度了一下,这个25g180块http://www.foodmate.net/sell/show-238826.html, 还有阿里巴巴上有1000块1kg的,都是食品级的, ...

哈哈，原来还有食品级的！来源有些不同，分子生物学用的都是从眼镜蛇蛇毒里面分离的，这个酶一直没有重组的卖，这样一听就比较贵。
你这个是从橘子皮的青霉里面分离的！~长见识啦！
打听一下，你这个发酵过的渣，是什么东西？完整的细胞还是什么？
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10楼2014-05-14 10:25:41
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