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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » Western曝光后无条带，跪求指教！！！
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家平

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
39楼: Originally posted by dengming1983 at 2014-05-15 17:00:03
5%脱脂奶粉封闭的，一抗过夜也是在奶粉液里的。是不是一抗孵育不需要加奶粉？这些步骤之前是做出来过的哦...

目的蛋白一样吗？不一样的目的蛋白条件也会略有不同，另外，你必须要保证试剂质量的前提下才能谈方法

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修身，齐家，治国，平天下
41楼2014-05-15 22:13:03
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dengming1983

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
40楼: Originally posted by kingsa at 2014-05-15 18:57:00
一抗不是用TBST稀释吗？...

一抗孵育液TBST里也加了奶粉
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42楼2014-05-15 22:26:27
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dengming1983

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
41楼: Originally posted by 家平 at 2014-05-15 22:13:03
目的蛋白一样吗？不一样的目的蛋白条件也会略有不同，另外，你必须要保证试剂质量的前提下才能谈方法
...

试剂应该是是绝对保证的，都是新的cell signaling的好抗体。目的蛋白有几种都是中分子量的40多到60多kb的几种信号通路蛋白
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43楼2014-05-15 22:27:59
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shaozhenjun

木虫 (小有名气)
引用回帖:
37楼: Originally posted by kingsa at 2014-05-15 10:09:12
封闭步骤我就是在摇床进行的。

转膜电流高了，是怕会转过头吗？我用了2层PVDF膜，接近胶的膜上marker条带清晰，另一膜上几乎没有条带。应该不会转过头吧？...

如果所有步骤都没有问题的话，就找找你抗体的原因了，暂时不能给出具体的意见了，你跑胶和转膜的设备用的是bio-rad的仪器吗
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44楼2014-05-16 08:47:39
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kk1424

主管区长 (著名写手)

中药研究者

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

第一次不用曝光，用丽春红染色，看看条带情况。
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药理毒理
45楼2014-05-20 09:34:38
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昆虫霸霸

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
44楼: Originally posted by shaozhenjun at 2014-05-16 08:47:39
如果所有步骤都没有问题的话，就找找你抗体的原因了，暂时不能给出具体的意见了，你跑胶和转膜的设备用的是bio-rad的仪器吗...

我想问一下，后来效果如何？是抗体原因吗？
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实验加油！
46楼2015-10-23 09:14:41
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