应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » Western曝光后无条带，跪求指教！！！
464/5返回列表上一页12345下一页
查看: 6671  |  回复: 45
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

kingsa

木虫 (正式写手)
内容已删除
回复此楼
随心而动，如风自在
31楼2014-05-14 09:25:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kingsa

木虫 (正式写手)
引用回帖:
31楼: Originally posted by kingsa at 2014-05-14 09:25:20
实验条件：
脑组织蛋白是上个月提取的，在-80℃冰箱保存差不多3周后，家裂解液冰浴超声裂解、BCA测浓度、加loading配制上样缓冲液、沸水浴变性，然后分装储存于-20℃冰箱。第二天开始WB实验。

目的蛋白18KD，β ...

以上是我实验条件和整个过程，求各位大神告诉我可能是哪步出了问题？

我昨天借了朋友的抗体，今天重新开工，看看是不是抗体的问题

各位大神，求指教啊！
赞一下 回复此楼
随心而动，如风自在
32楼2014-05-14 09:27:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dengming1983

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
29楼: Originally posted by 家平 at 2014-05-14 08:42:14
你封闭的是不是有点厉害了
...

就是脱脂奶粉TBS液封闭一小时
赞一下 回复此楼
33楼2014-05-15 06:11:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

家平

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
33楼: Originally posted by dengming1983 at 2014-05-15 06:11:37
就是脱脂奶粉TBS液封闭一小时...

浓度高吗，调低试试

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
修身，齐家，治国，平天下
34楼2014-05-15 08:50:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaozhenjun

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

5%脱脂奶粉封闭步骤最好在摇床进行哈，你这个转膜的电流是不是有点高哦，我以前用的是恒压，60V 2h的，300mA的电流应该高了，我很久没做了也记得不是很清楚。祝你好运
赞一下 回复此楼
35楼2014-05-15 09:24:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kingsa

木虫 (正式写手)
引用回帖:
34楼: Originally posted by 家平 at 2014-05-15 08:50:48
浓度高吗，调低试试
...

什么试剂浓度高了？5%脱脂奶粉吗？
赞一下 回复此楼
随心而动，如风自在
36楼2014-05-15 10:06:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kingsa

木虫 (正式写手)
引用回帖:
35楼: Originally posted by shaozhenjun at 2014-05-15 09:24:54
5%脱脂奶粉封闭步骤最好在摇床进行哈，你这个转膜的电流是不是有点高哦，我以前用的是恒压，60V 2h的，300mA的电流应该高了，我很久没做了也记得不是很清楚。祝你好运

封闭步骤我就是在摇床进行的。

转膜电流高了，是怕会转过头吗？我用了2层PVDF膜，接近胶的膜上marker条带清晰，另一膜上几乎没有条带。应该不会转过头吧？
赞一下 回复此楼
随心而动，如风自在
37楼2014-05-15 10:09:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

家平

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
36楼: Originally posted by kingsa at 2014-05-15 10:06:59
什么试剂浓度高了？5%脱脂奶粉吗？...

对，有的蛋白要用3%奶粉封闭

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
修身，齐家，治国，平天下
38楼2014-05-15 11:04:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dengming1983

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
34楼: Originally posted by 家平 at 2014-05-15 08:50:48
浓度高吗，调低试试
...

5%脱脂奶粉封闭的，一抗过夜也是在奶粉液里的。是不是一抗孵育不需要加奶粉？这些步骤之前是做出来过的哦
赞一下 回复此楼
39楼2014-05-15 17:00:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kingsa

木虫 (正式写手)
引用回帖:
39楼: Originally posted by dengming1983 at 2014-05-15 17:00:03
5%脱脂奶粉封闭的，一抗过夜也是在奶粉液里的。是不是一抗孵育不需要加奶粉？这些步骤之前是做出来过的哦...

一抗不是用TBST稀释吗？
赞一下 回复此楼
随心而动，如风自在
40楼2014-05-15 18:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kingsa 的主题更新
464/5返回列表上一页12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:23 by Xc2FxHsHkBNc
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:50 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:28 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 23/1150 2026-11-07 06:49 by Equinoxhua
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭