24小时热门版块排行榜    

查看: 5714  |  回复: 45

sunrq516516

金虫 (小有名气)

引用回帖:
20楼: Originally posted by kingsa at 2014-05-12 22:56:15
我明天中午去曝光。

今天转膜的时候,我放了两层膜,然后分步做染色。靠近胶的那张膜上marker条带很清晰,染色后的条带也很明显;另一张上只隐约有些条带,几乎是空白的。应该不会转膜过度吧。

我想今天应该 ...

两层膜……姑娘你好厉害这办法都想的出来。当年我学的时候,博后跟我说一般PVDF不会出现转膜过度的情况。所以你用PVDF膜就不用担心这个咧。
同是WB沦落人,GOOD LUCK TOMORROW!
Permanent head Damage
21楼2014-05-12 21:05:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dengming1983

铁杆木虫 (著名写手)

哎,最近也是被Wb逼得要死,要赶紧搞完毕业了结果就是出不来目的条带。转膜后丽春红染色非常大的蛋白条带,曝光液也刚买了新的,就是没有条带出现,而且之前做两张膜,分别用旧的曝光液和新的曝光液分别曝光,新的显示内参了,旧的没有。所以更换新的曝光液,结果目的条带还是出不来。咋搞?今天加倍一抗过夜再看看,各位有啥高见的指导下
22楼2014-05-12 21:15:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kingsa

木虫 (正式写手)

引用回帖:
21楼: Originally posted by sunrq516516 at 2014-05-12 21:05:38
两层膜……姑娘你好厉害这办法都想的出来。当年我学的时候,博后跟我说一般PVDF不会出现转膜过度的情况。所以你用PVDF膜就不用担心这个咧。
同是WB沦落人,GOOD LUCK TOMORROW!...

谢谢你的祝福,我也祈祷明天好运吧,再曝不出来我就要疯了!
随心而动,如风自在
23楼2014-05-12 21:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kingsa

木虫 (正式写手)

引用回帖:
23楼: Originally posted by kingsa at 2014-05-12 21:25:25
谢谢你的祝福,我也祈祷明天好运吧,再曝不出来我就要疯了!
...

满怀希望去曝光,结果还是一样。泪崩……

曝光液是新买的,现用现配,曝光时间也增长到10min了。
难道抗体有问题吗?


求助啊!!!
随心而动,如风自在
24楼2014-05-13 12:22:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lid2004

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

没想到WB还难倒这么多人。
1. 先查抗体:看厂家是不是有图,上样量多少。这个抗体有没有相关的文献
2. 最好带阳性对照,当然内参算一个阳性对照。但现在好多公司也卖抗原过表达的细胞裂解液,作为阳性对照。
3.你的目的条带比较小,18kd,电泳的时候注意电压别太大,时间可以适当减少,别跑过了。转膜时间不用过分延长。
4. 注意样品处理的问题,是不是加了酶抑制剂,是不是低温环境制备的,排除样品制备问题。你的样品检测过别的抗体没有,好用吗?
25楼2014-05-13 14:34:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LZLLZLLZL

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

背景都没有啊,考虑一下二抗浓度,TBST洗膜的速度和时间。
26楼2014-05-13 18:46:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

treetreew

木虫 (小有名气)

重提个蛋白
多借几个1抗
不剪膜
27楼2014-05-14 08:24:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

家平

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你孵二抗了吗?二抗对应不

[ 发自小木虫客户端 ]
修身,齐家,治国,平天下
28楼2014-05-14 08:40:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

家平

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
22楼: Originally posted by dengming1983 at 2014-05-12 21:15:30
哎,最近也是被Wb逼得要死,要赶紧搞完毕业了结果就是出不来目的条带。转膜后丽春红染色非常大的蛋白条带,曝光液也刚买了新的,就是没有条带出现,而且之前做两张膜,分别用旧的曝光液和新的曝光液分别曝光,新的显 ...

你封闭的是不是有点厉害了

[ 发自小木虫客户端 ]
修身,齐家,治国,平天下
29楼2014-05-14 08:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaozhenjun

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

转膜是半干转还是湿转,如果是湿转有没有采用冰袋降温,Marker一般很容易转上的,选用的是什么膜,PVDF or NC膜,孔径大小?蛋白封闭时间,抗体孵育时间?洗膜次数是否足够?显色液使用哪个厂家的?
30楼2014-05-14 08:51:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kingsa 的主题更新
信息提示
请填处理意见