| 查看: 880 | 回复: 7 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
NADH氧化酶的测定问题
|
|||
|
近日要测定NADH氧化酶酶活，由于以前没测过，所以根据文献上的方法进行测定，如下：对数期细胞离心，用磷酸钾缓冲液（pH＝7洗一遍），超声，而后离心碎片去上清。500微升的反应体系：50mM的磷酸钾缓冲液（pH＝7），0.3mM的EDTA，0.3mM的NADH。而后加入10微升的合适浓度的样品，在340nm处测定吸光度的减少。 我按照上述方法进行测定，只是把磷酸钾溶液换成了Tris－HCL（ph＝7.8），但是发现吸光度没有变化，不知问题出在哪里，还望请教！ 我第一次测酶活，有以下问题： 1是不是配溶液时都需无菌水 2NADH配好是不是要立即测，多长时间就失效了 3我的菌是革兰氏阳性菌（兽疫链球菌），超声一小时应该足够破碎了吧？ 4测定酶活温度为30度，是不是温度对他的影响特别大，因为开始我想先试试，所以温度没有控制（主要我们实验室分光光度计没有温控装置，要去其它实验室用，麻烦），温度大概有20度，在此条件下测定没有变化。 希望大叫不吝赐教，我是新手，问题比较弱，希望大家给予支持！  |
回复此楼» 猜你喜欢
291求调剂
已经有7人回复
-
材料与化工272求调剂
已经有13人回复
-
283求调剂（080500）
已经有5人回复
-
材料科学与工程求调剂
已经有5人回复
-
一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂
已经有17人回复
-
考研调剂
已经有7人回复
-
343求调剂085601
已经有3人回复
-
08工科求调剂286
已经有3人回复
-
337求调剂
已经有3人回复
-
329求调剂，一志愿西北工业大学，材料工程（085601）
已经有10人回复
5楼2008-03-18 22:11:59
Airare
金虫 (正式写手)
虫游天下
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1409.2
- 散金: 56
- 红花: 1
- 帖子: 667
- 在线: 52.5小时
- 虫号: 442605
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 细胞信号转导
2楼2008-03-12 09:49:14
3楼2008-03-18 10:14:48
Airare
金虫 (正式写手)
虫游天下
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1409.2
- 散金: 56
- 红花: 1
- 帖子: 667
- 在线: 52.5小时
- 虫号: 442605
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 细胞信号转导
4楼2008-03-18 18:49:26
