应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒酶切
121/2返回列表12下一页
查看: 1247  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sonhey

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切 已有5人参与

请问怎样保证质粒酶切彻底，如果不彻底，那又该如何检测。新手求助    谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
且行且珍惜
1楼 2014-05-05 12:32:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-05 15:56:20
参见百度文库文章 ：分​子​生​物​学​中​的​基​因​克​隆​操​作​的​基​本​技​巧​之​一​：​精​确​计​算​限​制​性​内​切​酶​的​用​量
http://wenku.baidu.com/view/1b0ea0d608a1284ac85043ef.html
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-05-05 13:52:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-05 15:56:10
仔细阅读内切酶的说明书，按照说明书上的反应体系酶切，一般是没有问题的。质粒不要加太多，我做克隆质粒一般切0.2微克。
切开的质粒和没有切开的质粒琼脂糖凝胶电泳能看出差别。
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-05 12:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zep616745243

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-05 15:56:36
如果单纯是摸索条件，可以分时间段取出3-5ul跑电泳，切没切开一目了然，一般参照说明书的就没有问题了
赞一下 回复此楼
只有不断地失败才会成功
4楼2014-05-05 14:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
少切点质粒就好，酶切产物做个转化就知道了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2014-05-05 16:39:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sonhey

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by BioChen at 2014-05-05 12:40:02
仔细阅读内切酶的说明书，按照说明书上的反应体系酶切，一般是没有问题的。质粒不要加太多，我做克隆质粒一般切0.2微克。
切开的质粒和没有切开的质粒琼脂糖凝胶电泳能看出差别。

我的想法是这样的
1、如果是平端加入去磷酸化酶，尽量避免
2、做转化，然后培养提取质粒跑胶，并与原质粒作对比，即1是marker 2原质粒3提取质粒 跑胶作对比，然后对所验证正确的进行胶回收，不知道这样行吗
赞一下 回复此楼
且行且珍惜
6楼2014-05-05 17:57:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sonhey

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-05-05 14:15:16
如果单纯是摸索条件，可以分时间段取出3-5ul跑电泳，切没切开一目了然，一般参照说明书的就没有问题了

我感觉总是会有切不彻底的，那样的话该怎样避免呢
赞一下 回复此楼
且行且珍惜
7楼2014-05-05 17:58:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sonhey

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by panda73 at 2014-05-05 13:52:41
参见百度文库文章 ：分​子​生​物​学​中​的​基​因​克​隆​操​作​的​基​本​技​巧​之​一​ ...

你好   我对day1的第一步有点不解，望指点。PCR过后不就是咱们的目的基因吗，胶回收以后为什么还做一下酶切呢，做酶切是不是来增加他的末端（平末端或粘性末端）。谢谢回答
赞一下 回复此楼
且行且珍惜
8楼2014-05-05 18:43:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zep616745243

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sonhey at 2014-05-05 17:58:42
我感觉总是会有切不彻底的，那样的话该怎样避免呢...

要避免的话，可以考虑降低质粒的量，或者延长酶切时间，个人感觉takara的quickcut酶还是不错的，切得很彻底，我用双酶切产物做转化，都不会长菌
赞一下 回复此楼
只有不断地失败才会成功
9楼2014-05-05 19:26:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切彻底不彻底，先跑胶看看，然后再通过连接转化做对照，没有什么其他特别的办法吧

当然可以演唱酶切时间，提高酶／DNA比，这样也可以保证高切割率
赞一下 回复此楼
10楼2014-05-06 04:58:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sonhey 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 7/350 2026-08-25 03:24 by BZKMTicpDhFj
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-25 01:47 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 明天应该可查了！？ +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭