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glzeng金虫 (小有名气)
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[交流]
求助：聚合物多肽分子量的测定
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大家好，我现在在做一个聚合物多肽，结果遇到一些问题。产品已经拿到，但是没法准确测定其平均分子量。 这种聚合物是由A,B,C,D四种单体随机聚合而成，肽链中没有固定的肽序，肽链的长度也不是固定的，可以是ACBDACBAAD...., 也可以是ABDCAADABCA......等等。因此它是一个混合物，只有一个平均分子量的概念， 现在我采取方法就是用水溶性柱子，加上一个紫外检测器，测出一条曲线，然后再在同样的条件下测定几个具有一定分子量的标准物质，将它们的保留时间和分子量作一条标准曲线，再从中查出产品的平均分子量（这种方法有文献支持，除此之外，没有看到有用其他方法进行测定这种产品的，所以其他方法是否可行，心里一直都没底）。 这样的方法还是有问题，由于标准品的肽链结构及电荷分布与我的产品有一定的差别，因此得到的结果误差比较大（用一个分子量已知（分子量用质谱测定过），纯度为97％的多肽进行校正，其结果误差达到100％，我的要求为<20%），我现在采取的解决办法是自己设定一定的肽序和肽链的长度（即分子量是一定的），通过固相的方法合成一些标准品，这样的话它们的性质应该与我的产品几乎是完全一致的。用质谱测出它们的准确分子量，然后再作它们的标准曲线（这种解决方案也有文献支持），不知道还有没有其他方法可以代替这种方法，是否一定需要这样做（标准品的合成难度十分大，其中一个氨基酸达到100个左右）？请大家指点一下！ [ Last edited by zhangwj on 2008-12-20 at 01:36 ] |
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Why not try SDS-page? Please pay attention to choose proper gel, such as NEXT-GEL, which is sensitive to peptide or low MW protein fragment. Compared with the standard mark, you can get the molecular weight. If you peptide contains tryptophan and it is fluorescence activity, you can try fluorescence bleach and recover experiment to get average "size" of you pepetide and then calculate MW. |
2楼2008-03-11 06:37:28
glzeng
金虫 (小有名气)
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3楼2008-03-13 20:26:48