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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 工艺研究 » 小弟刚买回来100克葡聚糖G-15填料，不知道如何处理，没有说明书-求指导！
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cy211

木虫 (职业作家)

[求助] 小弟刚买回来100克葡聚糖G-15填料，不知道如何处理，没有说明书-求指导！ 已有2人参与

小弟刚买回来100克葡聚糖G-15填料，不知道如何处理，没有说明书----求指导的大神帮帮忙吧！有谁用过的，或者有说明书的给小弟一份吧，我就是不知道，怎么处理，一直到装柱子，具体怎么操作，有谁用过的给指点一下吧！！！！！！谢谢大家了！！！！
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1楼 2014-04-30 16:09:12
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cy211

木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuyelin at 2014-05-04 09:17:09
葡聚糖G15与G25处理方法一样，供参考。
1.实验凝胶的制备：商品凝胶是干燥的颗粒，使用时需经溶胀处理，称取4克葡聚糖凝胶G—25，加50毫升蒸馏水，搅拌均匀，在室温溶胀6小时，或沸水浴溶胀 2小时，一般采用后一种 ...

您的回复太有用了，非常感谢啊！但是我看见一些资料说，先用50-60%的乙醇泡24小时，之后再用去离子水泡24小时，之后缓冲溶液泡才上柱子，这种方法靠谱么？还有小弟想请教一下，我的柱子大概60cm长，我现在有100克填料，我得大概取多少合适啊？
还有您说的第一步4克填料加50毫升水，这个比例是怎么来的？有参考？还是固定的？
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6楼2014-05-04 10:44:15
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计量泵

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以下供参考：
　　　凝胶过滤填料的分离范围表
　　　SephadexG-10葡聚糖凝胶 G-10    分离范围<700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
　　　Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15    分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
　　　Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15    分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
　　　Sepharose 6B 琼脂糖凝胶 6B    分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
　　　ConA-Sepharose ConA琼脂糖凝胶    分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
　　　Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶 G-25 中    分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
　　　Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶 G-25 中    分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
　　　Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶 G-25 细    分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
　　　Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶 G-25 细    分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
　　　SephadexG-50 Medium 葡聚糖凝胶 G-50 中    分离范围 1500-30000
　　　Sephadex G-50 Medium 葡聚糖凝胶 G-50 中    分离范围 1500-30000
　　　Sephadex G-75 葡聚糖凝胶 G-75    分离范围 3000-80000
　　　Sephadex G-75 葡聚糖凝胶 G-75    分离范围 3000-80000
　　　DEAE Sepharose FF DEAE琼脂糖凝胶 FF    分离范围：3000-80,000
　　　Sephadex G-100 葡聚糖凝胶 G-100    分离范围 4000-150000
　　　Sephadex G-100 葡聚糖凝胶 G-100    分离范围 4000-150000
　　　Sephadex G-150 葡聚糖凝胶 G-150    分离范围 5000-300000
　　　DEAE Sepharose CI-6B 琼脂糖凝胶CI-6B    分离范围：5000-300,000
　　　Sephadex G-150 葡聚糖凝胶 G-150    分离范围 5000-300000
　　　Sephadex G-200 葡聚糖凝胶 G-200    分离范围 5000-600000
　　　Sephadex G-200 葡聚糖凝胶 G-200    分离范围 5000-600000
　　　Sephadex G-200 葡聚糖凝胶 G-200    分离范围 5000-600000
　　　DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶 A-25    颗粒大小：40-120μm 分离大小：小蛋白及巨大分子
　　　DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶 A-25    颗粒大小：40-120μm 分离大小：小蛋白及巨大分子
　　　DEAE Sephades A-50 DEAE DEAE葡聚糖凝胶 A-50    颗粒大小：40-120μm，分离范围：小蛋白及巨大分子
　　做纯化的人可能经常接触到sephadex，BIO-Gel，sephacryl s-,sepharose BIo-Gel等几种填料，有时会混淆在一起，看到一个贴子较好的介绍了这些填料的区别，希望对大家有用。sephadex(葡聚糖凝胶）：是由葡聚糖苷和3-氯-1，2环氧丙烷以醚键相互铰链而成，不同型号的葡聚糖凝胶用英文字母G表示，如G-25，G-75等，G后面的数字为凝胶吸水量再乘以10。sephacryl：为葡聚糖偶联丙烯基，再和甲叉双丙烯酰胺聚合而成的介质。它有较高的硬度，能承受比普通凝胶更大的静水压力，由于属于部分大网孔型凝胶，可用于分离蛋白质、核酸、多糖和蛋白聚糖甚至是病毒颗粒。sepharose琼脂糖：瑞典称sepharose；美国称Bio-gel A；英国称Segavac；丹麦称Gelarose。Sepharose主要有三种型号：2B，4B，6B，阿拉伯数字表示凝胶中干胶的百分含量。
　　　Bio-GA有6个型号：0.5M,1.5M,5M,15M,50M,150M。阿拉伯数字乘以1000000表示排阻限度。Sagavac分为：2F,4F,6F,8F,10F2℃4C6℃8C10℃阿拉伯数字表示凝胶中干胶的百分含量，F表示粉末状，C表示颗粒状。Gelarose有5种类型：2%，4%，6%，8%，10%。百分数表示干胶量。琼脂糖凝胶属于大孔胶，由于其工作范围的下限几乎相当于葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶的上限，所以多用于分离400000以上的物质，比如核酸和病毒。聚丙烯酰胺凝胶：由单体丙烯酰胺合成线性多聚物，商品名为Bio-Gel P，有十种类型：从Bio-Gel P-2到P-300，p后面的阿拉伯数字乘以1000即相当于排阻限度。这种胶在极端ph下可被水解，水解后形成的羧基，具有离子交换的性质。另外，sephadex G是葡聚糖凝胶交联的，用于除盐和纯化，BIO-Gel P-是聚丙烯酰胺凝胶，它们的刚性都不是很好，尤其是得水值越大的，越是如此。而sephacryl s-,是经过接枝再交联的葡聚糖凝胶，刚性比sephadex G好很多，如果你纯化的物质分子量小些，那可以用sephadex G是，中等偏大的选择sephacryl s-,特别大的就得选择sepharose（琼脂糖凝胶），例如几十到上百KD的蛋白，或者是病毒，大分子的超螺旋DNA等，而BIo-Gel A也是琼脂糖凝胶。它们只是不同的公司而已，性能差别不大。
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2楼2014-04-30 17:36:45
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yuyelin

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 计量泵 at 2014-04-30 17:36:45
以下供参考：
　　　凝胶过滤填料的分离范围表
　　　SephadexG-10葡聚糖凝胶 G-10    分离范围<700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
　　　Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15   ...

答非所问，没做过的话最好不要误人子弟。从别的地方粘过来，却不知道这样的答案一点用处都没有。
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若嗔若痴，不见风云
3楼2014-05-04 09:11:00
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yuyelin

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
cy211(星海慧儿代发): 金币+3, 很有帮助，多谢回帖交流。 2014-05-04 10:59:55
葡聚糖G15与G25处理方法一样，供参考。
1.实验凝胶的制备：商品凝胶是干燥的颗粒，使用时需经溶胀处理，称取4克葡聚糖凝胶G—25，加50毫升蒸馏水，搅拌均匀，在室温溶胀6小时，或沸水浴溶胀 2小时，一般采用后一种方法。再用倾泻法除去凝胶上层水及细小颗粒，用蒸馏水反复洗涤几次，再以缓冲溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗涤2—3次，使pH和离子强度达到平衡，最后抽去溶液及凝胶颗粒内部气泡，凝胶可保存在缓冲液内。
2.装柱：将层析柱洗净，垂直固定在铁支架上，选择有薄膜端作为层析柱下口，将下口接上乳胶管并用螺旋夹夹紧。层析柱中加入洗脱液，打开下口螺旋夹，让溶液流出，排除残留气泡，最后保留约2厘米高度的洗脱液，拧紧螺旋夹。将凝胶轻轻搅动均匀，用玻璃棒沿层析柱内壁缓缓注入柱中，待凝胶沉积到柱床下已超过l厘米时，打开下口螺旋夹，继续装柱至柱床高度达到8厘米,关闭出口。装柱过程中严禁产生气泡，尽可能一次装完，避免出现分层。再用洗脱液平衡l至2个柱床体积，凝胶面上始终保持有一定的洗脱液。平衡后，拧紧下端螺旋夹。
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若嗔若痴，不见风云
4楼2014-05-04 09:17:09
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