24小时热门版块排行榜    

查看: 3082  |  回复: 66
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

cy211

木虫 (职业作家)

[求助] 小弟刚买回来100克葡聚糖G-15填料,不知道如何处理,没有说明书-求指导!已有2人参与

小弟刚买回来100克葡聚糖G-15填料,不知道如何处理,没有说明书----求指导的大神帮帮忙吧!有谁用过的,或者有说明书的给小弟一份吧,我就是不知道,怎么处理,一直到装柱子,具体怎么操作,有谁用过的给指点一下吧!!!!!!谢谢大家了!!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyelin

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 计量泵 at 2014-04-30 17:36:45
以下供参考:
   凝胶过滤填料的分离范围表
   SephadexG-10葡聚糖凝胶 G-10    分离范围<700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
   Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15   ...

答非所问,没做过的话最好不要误人子弟。从别的地方粘过来,却不知道这样的答案一点用处都没有。
若嗔若痴,不见风云
3楼2014-05-04 09:11:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyelin

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
cy211(星海慧儿代发): 金币+3, 很有帮助,多谢回帖交流。 2014-05-04 10:59:55
葡聚糖G15与G25处理方法一样,供参考。
1.实验凝胶的制备:商品凝胶是干燥的颗粒,使用时需经溶胀处理,称取4克葡聚糖凝胶G—25,加50毫升蒸馏水,搅拌均匀,在室温溶胀6小时,或沸水浴溶胀 2小时,一般采用后一种方法。再用倾泻法除去凝胶上层水及细小颗粒,用蒸馏水反复洗涤几次,再以缓冲溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗涤2—3次,使pH和离子强度达到平衡,最后抽去溶液及凝胶颗粒内部气泡,凝胶可保存在缓冲液内。
2.装柱:将层析柱洗净,垂直固定在铁支架上,选择有薄膜端作为层析柱下口,将下口接上乳胶管并用螺旋夹夹紧。层析柱中加入洗脱液,打开下口螺旋夹,让溶液流出,排除残留气泡,最后保留约2厘米高度的洗脱液,拧紧螺旋夹。将凝胶轻轻搅动均匀,用玻璃棒沿层析柱内壁缓缓注入柱中,待凝胶沉积到柱床下已超过l厘米时,打开下口螺旋夹,继续装柱至柱床高度达到8厘米,关闭出口。装柱过程中严禁产生气泡,尽可能一次装完,避免出现分层。再用洗脱液平衡l至2个柱床体积,凝胶面上始终保持有一定的洗脱液。平衡后,拧紧下端螺旋夹。
若嗔若痴,不见风云
4楼2014-05-04 09:17:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyelin

木虫 (正式写手)

★ ★
cy211(zhychen2008代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-05-05 12:36:46
引用回帖:
6楼: Originally posted by cy211 at 2014-05-04 10:44:15
您的回复太有用了,非常感谢啊!但是我看见一些资料说,先用50-60%的乙醇泡24小时,之后再用去离子水泡24小时,之后缓冲溶液泡才上柱子,这种方法靠谱么?还有小弟想请教一下,我的柱子大概60cm长,我现在有100克填 ...

其实好多方法都是大同小异,用乙醇,去离子水溶胀都可以,但是最后都要是水。还有上柱子的话最好是用水上,否则你弄得柱子和仪器上都是缓冲液,干了以后不好清洗,很容易腐蚀仪器。比例的话你可以看一下说明书,应该有个溶胀的比例。说明书在GE网站上都可以查到的。
若嗔若痴,不见风云
7楼2014-05-04 11:11:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyelin

木虫 (正式写手)


cy211(星海慧儿代发): 金币+1, 有帮助,多谢回帖交流。 2014-05-06 08:52:10
引用回帖:
8楼: Originally posted by cy211 at 2014-05-04 17:39:46
因为买的是国产的,我看了一下它就有一个数据:膨胀体积:2.5-3.5ml/g,是不是意思就是我的一克填料大概能膨胀成3克左右,哪我是不是应该加乙醇和去离子水使其膨胀的前处理都是填料的3倍啊?就是我100克的调料加300毫 ...

用乙醇和去离子水的膨胀比不一样的,用乙醇比去离子水的膨胀体积小。应该是1g填料膨胀到2.5-3.5ml。水可以加多点,膨胀完全了,本身就不再吸水了,静止的话会有上清的水出来的。
若嗔若痴,不见风云
10楼2014-05-05 09:57:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyelin

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by cy211 at 2014-05-04 17:48:22
还有您说的这句----再以缓冲溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗涤2—3次,使pH和离子强度达到平衡,最后抽去溶液及凝胶颗粒内部气泡,凝胶可保存在缓冲液内。 那上柱子的时候这个凝胶不就是在缓冲溶液中么?
我是不是 ...

对的,上柱子的时候把缓冲液置换出来。
若嗔若痴,不见风云
11楼2014-05-05 09:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyelin

木虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by cy211 at 2014-05-05 10:18:08
您好,那您说这个膨胀体积:2.5-3.5ml/g是加水的时候的膨胀体积是这么大是吧?大概是3倍左右,您说乙醇的膨胀体积比水小,那是不是我就应该多加点乙醇,比如100克填料加入400ML乙醇,这个乙醇和去离子水加多点没什 ...

再多一些都没有问题,你上柱子的时候膨胀完的填料里面也要加水,要多出三分之一的清水才可以。
若嗔若痴,不见风云
13楼2014-05-05 10:23:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyelin

木虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by cy211 at 2014-05-05 10:28:16
太感谢你的回复了,还有一个问题就是上样的时候,我查资料说,最好是凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,这个柱床体积是怎么计算的?我以前没过过柱子,不懂!...

你装完柱子后,凝胶的体积。柱子底面积乘以高。
若嗔若痴,不见风云
16楼2014-05-05 10:34:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyelin

木虫 (正式写手)


cy211(星海慧儿代发): 金币+1, 有帮助,多谢回帖交流。 2014-05-06 08:52:30
引用回帖:
15楼: Originally posted by cy211 at 2014-05-05 10:33:37
不好意思,我还有一个问题,就是上柱子前需要脱气,这个步骤是怎么操作的啊?...

上柱子用的液体超声脱气,或者泵抽气。
若嗔若痴,不见风云
17楼2014-05-05 10:36:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyelin

木虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by cy211 at 2014-05-05 10:48:08
我就把我的填料和去离子水的悬浮液的烧杯,直接放在超声仪里面,超声脱气就行了吧?大概多长时间,这个有限制么?...

填料不超声呀,所用的溶液和水要超声
若嗔若痴,不见风云
19楼2014-05-05 11:06:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyelin

木虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by cy211 at 2014-05-05 10:48:08
我就把我的填料和去离子水的悬浮液的烧杯,直接放在超声仪里面,超声脱气就行了吧?大概多长时间,这个有限制么?...

大概15-20分钟的时间
若嗔若痴,不见风云
20楼2014-05-05 11:06:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cy211 的主题更新
信息提示
请填处理意见