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Carnity

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[交流] 为什么我用gDNA连一个3kb的片段都扩不出来？

如题，
话说，PCR做过了一大堆，从来还没遇见这种问题，提取的gDNA，定量过（1-2ug/uL），纯度也还不错，用来扩增一个3kb左右的片段，总是扩不出来。退火温度摸过，酶也换过，之前用LA Taq获得过片段，后来扩不出来了。哎，话说都有点怀疑gDNA的质量问题了。

有没有同遇到这类问题的虫们，来给指点指点啊。

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1楼 2014-04-29 11:19:04

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Carnity

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引用回帖:

9楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-04 06:17:02
1. 什么基因组？如何提取的DNA，保存方法是什么？保存了多久？
2. 3k的片段，你的pcr条件是什么？
3. 引物的设计，对于gDNA来说，20左右的碱基已经足够了，只要在基因组其他位置没有错配区就没有问题。

呃，问题没那么复杂，模板量，PCR体系、PCR条件的弹性空间都是有的。个人感觉要么就是模板问题，要么就是引物问题。不知道其他条件会不会产生较大影响。