应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 大家认为判断引物设计合理的主要依据有哪些
51/1返回列表
查看: 4282  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

简单的执着

银虫 (小有名气)

[求助] 大家认为判断引物设计合理的主要依据有哪些 已有3人参与

如题，不知道大家是怎么判断自己设计出来的引物合适不合适的
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-04-21 22:37:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 简单的执着 at 2014-04-21 23:16:08
如果进行RT-PCR后显示扩增曲线挺不错的，溶解曲线是单峰，这能不能说明引物设计合理呀...

“如果进行RT-PCR后显示扩增曲线挺不错的，溶解曲线是单峰”
这说明引物的特异性很好，但不能完全说明引物设计合理，还要看引物的扩增效率，做Realtime用标准曲线来检测引物的扩增效率

判断引物是否合理：
从设计角度来看，引物Tm值，GC含量，长度，二聚体形成满足一定的条件，但最终需要实践的检验，如果是做普通的基因克隆，基因型鉴定之类的，能扩增出条带就说明引物设计合理

但如果是做real time PCR，引物是否合理从下面两个方面判断：
1. 引物扩增的特异性--溶解曲线单峰
2. 引物的扩增效率--标准曲线判断 90%--110%可以接受
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2014-04-22 23:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

ottoKING

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
简单的执着(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-22 13:29:06
blast查特异性、退火温度，GC含量，还有就是引物二聚体什么的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-21 22:49:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

简单的执着

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ottoKING at 2014-04-21 22:49:23
blast查特异性、退火温度，GC含量，还有就是引物二聚体什么的

如果进行RT-PCR后显示扩增曲线挺不错的，溶解曲线是单峰，这能不能说明引物设计合理呀
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-21 23:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j134104

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
简单的执着(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-22 13:29:31
引用回帖:
3楼: Originally posted by 简单的执着 at 2014-04-21 23:16:08
如果进行RT-PCR后显示扩增曲线挺不错的，溶解曲线是单峰，这能不能说明引物设计合理呀...

一般可以。但是有时候存在非特异性扩增出现的溶解曲线也是单峰，所以最好同时跑一个凝胶电泳，看是不是单一条带。 还有另一种情况，比如端粒引物这种的容易形成二聚体，并且二聚体可以扩增，也会形成单一溶解曲线同时扩增曲线很漂亮。这种情况下可以加一个空白对照
赞一下 回复此楼
4楼2014-04-21 23:38:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 5BDX0d0WFp7t 2026-09-15 3/150 2026-09-17 16:27 by 0ngsZVSCTS7z
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 6/300 2026-09-17 14:17 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-17 13:51 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-17 13:39 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +8 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 11:27 by UAIjTRMuUFoj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 mibUvS8DDCwf 2026-09-15 4/200 2026-09-17 06:26 by k06BKNblrGRH
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 05:38 by k06BKNblrGRH
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 05:16 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:04 by k06BKNblrGRH
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:14 by Tql5LQhh5rLK
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 8/400 2026-09-17 02:04 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 01:38 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-16 22:26 by Tql5LQhh5rLK
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:50 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 02:35 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:47 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:35 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:58 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭