24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 696  |  回复: 5
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 flyhigher 的 3 个金币

flyhigher

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细菌基因敲除

没有做过分子的实验,老板一下子就让做基因敲除,现在一点门路都没有,同学都没人做,大家帮帮忙吧,现在敲除细菌染色体上的一段基因(500bp大概)最常用的方法或最容易实现的方法是什么啊,具体步骤都是什么啊,快帮帮我吧,要不然真的又得换题了,现在都博二了,马上就要中期了,郁闷死我了!!
[search]基因敲除[/search]

[ Last edited by flyhigher on 2008-3-19 at 11:06 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)


flyhigher(金币+1,VIP+0):多谢大侠,要是能详细些就好了啊
克隆基因上下游,中间连结选择标记,转化细菌,根据选择标记挑选转化子,进一步PCR southern杂交等验证转化子
2楼2008-03-06 08:07:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wujiequn

捐助贵宾 (小有名气)


flyhigher(金币+1,VIP+0):大侠能详细一点解释么?因为我是初入分生,很多都不懂,麻烦了!
接合转移,同源双交换
3楼2008-03-06 10:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyhigher

银虫 (小有名气)

哪位老大能详细一点指导以下我啊,多谢多谢了!
4楼2008-03-10 13:18:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elton_monkey

银虫 (初入文坛)

★ ★
flyhigher(金币+2,VIP+0):多谢多谢!
找一篇博士论文看看了,常见的就是单交换双交换了,接合转移方法都差不多,但是不同的细菌要选择不同的质粒,这个就比较麻烦了,如果你的菌没人做过,你就得把常用的质粒都筛一遍找到合适的。有些细菌如果没有合适的载体就只能噬菌体转染了,这个得看具体情况。
5楼2008-03-17 13:52:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

booksworm

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
flyhigher(金币+3,VIP+0):真是感谢啊!!
主要原理是同源重组的原则,利用同源序列的交换将你的目的基因敲除。具体:(1)找一个温敏性质粒;(2)用PCR的方法扩增你目的基因两侧各200bp左右的片段,要加上适当的酶切位点;(3)选择一个合适的抗性标记,(4)将抗性标记连接与两个片段的中间,然后与温敏质粒连接(5)转化大肠杆菌(6)通过合适的抗性筛选就可以了得到你的工程菌株了。
6楼2008-03-18 10:38:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 flyhigher 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕调剂 +5 椰椰。 2026-03-29 5/250 2026-03-29 20:50 by 唐沐儿
[考研] 275求调剂 +15 Micky11223 2026-03-25 20/1000 2026-03-29 20:44 by 唐沐儿
[考研] 调剂310 +12 温柔的晚安 2026-03-25 13/650 2026-03-29 20:01 by 无际的草原
[考研] 0856求调剂 +7 楒桉 2026-03-28 7/350 2026-03-29 08:28 by fmesaito
[考研] 329求调剂 +7 星野? 2026-03-26 7/350 2026-03-29 06:43 by 544594351
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-27 5/250 2026-03-28 14:25 by 唐沐儿
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +3 萝卜炖青菜 2026-03-28 3/150 2026-03-28 14:11 by 唐沐儿
[考研] 求调剂 +6 芦lty 2026-03-25 7/350 2026-03-28 13:13 by 唐沐儿
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考研] 272求调剂 +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-27 17:23 by laoshidan
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +4 哇呼哼呼哼 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:02 by zhyzzh
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 材料调剂 +8 匹克i 2026-03-23 8/400 2026-03-27 08:11 by hypershenger
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
信息提示
请填处理意见