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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白变性电泳（垂直电泳）求助！！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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billy5

铜虫 (著名写手)

[交流] 蛋白变性电泳（垂直电泳）求助！！！

近期一直跑SDS-PAGE电泳，按厂家所给的试剂盒（SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒）。
   10％分离胶+5%浓缩胶－－－－－－－－用于跑人血蛋白的样品

   

   状况：接通电极电流后，样品一直无法往下跑？一直在浓缩胶中，最后弥散厉害，只好停掉！
   
   电泳缓冲液是新配的，胶拿出来时还是很有弹性的！

   1.是否蛋白上样缓冲液有问题导致？     2.是否是蛋白所带电荷不够？    3.电泳缓冲液有问题 ？    4.电泳槽的正负极有问题？


   望高手赐教！！
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服气不服输！！！！！
1楼 2008-03-05 16:38:17
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心. 新虫鼓励奖2个
1 仔细检查是否电极接反，确认无误后检查电路是否畅通，预制胶要检查是否撕下密封胶带。
2 再次检查电泳槽内侧（凹型板一侧）是否漏液，是否内侧液面高于外侧，注意不要让两侧缓冲液联通。
3 蛋白样品是否与loading buffer混匀及加热变性？
4 电泳缓冲液按分子克隆上称量好配制即可，不用调PH值。
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金币是赌出来的
2楼2008-03-05 17:06:50
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.谢谢交流
除了楼上的说得外
你的样品是否盐浓度过大~~
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3楼2008-03-05 19:39:16
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billy5

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by wjswj at 2008-3-5 17:06:
1 仔细检查是否电极接反，确认无误后检查电路是否畅通，预制胶要检查是否撕下密封胶带。
2 再次检查电泳槽内侧（凹型板一侧）是否漏液，是否内侧液面高于外侧，注意不要让两侧缓冲液联通。
3 蛋白样品是否与loa ...

多谢指教！！  1－4都注意过了，依然出现问题：现在通过调整电泳液的液面高低，电压与电流值可以恢复正常，但是，样品依然停在浓缩胶中，还是不往下跑呀！！  
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服气不服输！！！！！
4楼2008-03-07 20:57:00
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billy5

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by elvias at 2008-3-5 19:39:
除了楼上的说得外
你的样品是否盐浓度过大~~

多谢指教！！   我跑的样品是稀释20倍的人血清样哦！！
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服气不服输！！！！！
5楼2008-03-07 20:59:00
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billy5

铜虫 (著名写手)
reasonspare(金币+0,VIP+0):这个水肯定不行的,我们都是双蒸过的去离子水. 一定是去离子水.
还有一个，想问问大家！！

配胶过程所用的均为‘娃哈哈’牌的纯净水，会有什么影响吗？

[ Last edited by billy5 on 2008-3-7 at 21:01 ]
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服气不服输！！！！！
6楼2008-03-07 21:00:42
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)
★
asr(金币+1,VIP+0)::P 多谢，欢迎常来交流！
引用回帖:
Originally posted by billy5 at 2008-3-7 21:00:
还有一个，想问问大家！！

配胶过程所用的均为‘娃哈哈’牌的纯净水，会有什么影响吗？

[ Last edited by billy5 on 2008-3-7 at 21:01 ]

只要是胶凝结了，就应该没有什么问题，不过你还是要换成双蒸水或是去离子水试试
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7楼2008-03-08 09:20:39
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dreamsail

银虫 (正式写手)
提醒楼主下下
封口的琼脂糖要用缓冲液配.
我以前就是没注意用DDH2O配的,结果跑不动.
你电泳仪的电流显示正常吗?
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8楼2008-03-08 11:18:18
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billy5

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by dreamsail at 2008-3-8 11:18:
提醒楼主下下
封口的琼脂糖要用缓冲液配.
我以前就是没注意用DDH2O配的,结果跑不动.
你电泳仪的电流显示正常吗?

多谢dreamsail的提醒！！！

电泳仪之前一直出现“电压偏低，电流偏高”的现象，后来通过调整电泳液的液面高低，电流显示可以回到以前的正常值！！
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服气不服输！！！！！
9楼2008-03-08 12:05:31
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
你配胶的时候是不是用缓冲液配的啊？浓缩胶PH6.8吧，分离胶PH8.0，大概是这个。胶里有没有加SDS？如同琼脂糖电泳一样，要是胶里没有缓冲液也是不可以跑的。如果这些都对，那我实在想不出还有什么其他问题了。自来水配的胶都可以用，因为你的缓冲液是足够强的。
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金币是赌出来的
10楼2008-03-11 08:43:18
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