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许愿猫

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因克隆 已有2人参与

我克隆的基因是通过转录组测序得到的，1500bp左右，CDS区1000bp，根据CDS区设计的引物进行PCR，但是几个月下来都没有结果，跪求各大神指点。
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1楼 2014-04-17 19:59:34
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个可能原因很多，你要说的详细点

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-04-18 07:43:34
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许愿猫

新虫 (初入文坛)
片段是已知的，但是PCR一直P不出我要的目的片段，我的目的片段是1000bp，程序是94度，4min，94度，30s，退火温度，45s，72度，2min，34个循环，我引物合成回来的TM值是65和67度，我做的梯度，从60到70度，都没P出来，求指点。
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3楼2014-04-18 10:10:46
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
梯度pcr，退火温度设48-65°试试
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做一个阳光、开朗的小和尚
4楼2014-04-18 12:45:45
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