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许愿猫

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因克隆 已有2人参与

我克隆的基因是通过转录组测序得到的,1500bp左右,CDS区1000bp,根据CDS区设计的引物进行PCR,但是几个月下来都没有结果,跪求各大神指点。
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个可能原因很多,你要说的详细点

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-18 07:43:34
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许愿猫

新虫 (初入文坛)

片段是已知的,但是PCR一直P不出我要的目的片段,我的目的片段是1000bp,程序是94度,4min,94度,30s,退火温度,45s,72度,2min,34个循环,我引物合成回来的TM值是65和67度,我做的梯度,从60到70度,都没P出来,求指点。
3楼2014-04-18 10:10:46
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
梯度pcr,退火温度设48-65°试试
做一个阳光、开朗的小和尚
4楼2014-04-18 12:45:45
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