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萍萍-2011木虫 (小有名气)
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氧化应激信号通路Nrf2/ARE基因表达问题 已有1人参与
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我想问你个问题，关于Nrf2/ARE信号通路的，Nrf2是调节细胞抗氧化应激的重要转录因子，在生理情况下，胞浆蛋白伴侣分子Keap1 与Nrf2结合使其抑制状态，在外界氧化应激源影响下，Nrf2与Keap1解耦联合后移入核内，与抗氧化反应元件结合，启动其调控的Ⅱ相解毒酶（SOD、MDA、NOS、CAT、GSH-PX等等）和抗氧化酶的基因（HO-1、Nrf2、γ--GCS、SOD、NQO1等）的表达，增加细胞对氧化应激的抵抗性从而发挥保护作用。按这定义，与正常组比较，模型组中Nrf2上调应该增多，给抗氧化药物组后进一步增高上调是吗？ 还有我的实验是用过氧化氢建立氧化损伤模型，以损伤浓度存活率在62%的浓度为建模浓度，分别测相关抗氧化指标试剂盒有LDH、SOD、MDA、T-AOC、GSH-PX、NOS、CAT，与正常组比较，LDH和MDA是模型增高，与模型组比较给药组降低，其他指标是与正常组比较，模型组比较降低给药组增高，我测的是细胞内外，而只有 SOD和GSH-PX是胞内胞外均趋势一样，其他只在胞外检测到，胞内无显著性差异。（理论是胞内为应该是反的吧？） 根据试剂盒测试结果，进行下一步PCR实验，现在我就是想问下Nrf2与γ--GCS的变化趋势是不是与正常组比较，模型组较正常组表达增高，抗氧化给药组较模型组表达进一步增高？还是与正常组比较，模型组较正常组表达下降，抗氧化给药组较模型组表达增高？还是与正常组比较，模型组较正常组表达升高，抗氧化给药组较模型组表达降低？请问哪位大侠能帮忙解决？如果出现上述情况，分别该做如何解释？哪位好心大侠帮忙解决，可解决，金币多多发。重重赏！ 急急急急急急急急急急。。。。。。。。求解决？ |
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dinglong178
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【答案】应助回帖
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我有些接触，暂且冒充回答一下。 第一，我觉得应该弄清楚一个问题，就是你的双氧水氧化损伤模型，细胞存活率在62%，我觉得有些损伤过度，而且重要的是你用的是存活率，而不是viability(细胞活性)，应该只有活细胞才会发生氧化应激抑制作用吧， 第二，另外你用的什么细胞，双氧水处理多长时间？理论上细胞损伤程度与时间呈V型曲线，损伤时间长了，细胞自身就开始修复了。 第三，双氧水本身就有双面作用，既能造成细胞氧化损伤，也能在一定程度上上调Nrf2水平，抗氧化剂对正常组细胞的作用可能没那么明显，那么应该在模型组使用抗氧化剂，主要和模型组比较，，模型组和试验组都得和正常组比较，比较作用不一样 |
2楼2014-04-16 19:05:30
萍萍-2011
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