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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 有关NRF2信号通路的问题，希望各位大牛帮助解答
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crystalfrog

铜虫 (小有名气)

[求助] 有关NRF2信号通路的问题，希望各位大牛帮助解答

大家好，我最近在考虑自己的项目开始探讨NRF2转录因子的作用。因为在自己的细胞中，很多NRF2下游调控的蛋白表达水平都下降了。本人之前对于NRF2信号通路不甚了解，所以想请教大家。问题如下：
1. 根据文献报道，NRF2的转录活性调控是倾向于改变NRF2的整体水平还是核内水平？也就说为了初步看看细胞中NRF2转录活性是否改变，简单的WB是否能够说明问题，是否有意义？还是说必须得要提核或者做reporter？
2. 现在普遍大家认为的调控NRF2本身活性的上游信号通路集中在哪些方面？
希望大家不吝赐教，谢谢！
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1楼 2013-02-22 21:40:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jojo然

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by crystalfrog at 2013-05-03 08:33:00
你是说那个在大肠杆菌中表达Nrf2的那篇吗？貌似看过。作者说凡是主带在70KD附近的文章都是有问题的，之前的抗体筛选也是有问题的，把我乐了半天...

是这篇，你可以看一下.....
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  • 附件 1 : ThePredictedMolecularWeightofNrf2ItIsWhatItIsNot.pdf
    • 2013-05-03 19:02:35, 213.64 K
9楼2013-05-03 19:01:50
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peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-02-25 13:35:20
crystalfrog: 金币+5, 感谢。我已经砸了WB，发现whole cell lysate中丰度的确降低，但在核内的变化却很诡异，有两条带，分子量较高的条带降低，较低的却升高。 2013-03-03 14:59:58
整体的wb也是有意义的，整体的变化了，估计是降解了，看看降解途径，后面就好做了。整体没改变，核内改变了，也可以说明问题，这个是你的实验的探索过程。report能直接说明问题，为什么不做。
第二点，问题不是这样考虑的，调控因素这么多，集中的通路并不一定是你的。应该考虑自己的东西，考虑可能影响到哪一个通路，再去尝试。
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2楼2013-02-24 20:46:32
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crystalfrog

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peakg7 at 2013-02-24 20:46:32
整体的wb也是有意义的，整体的变化了，估计是降解了，看看降解途径，后面就好做了。整体没改变，核内改变了，也可以说明问题，这个是你的实验的探索过程。report能直接说明问题，为什么不做。
第二点，问题不是这样 ...

请问您是否砸过NRF2的WB?
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3楼2013-03-03 15:00:29
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peakg7

新虫 (小有名气)
做过
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4楼2013-03-03 16:32:00
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crystalfrog

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by peakg7 at 2013-03-03 16:32:00
做过

我在HeLa细胞中做的Nrf2，用的是Cell Signaling的抗体。发现其在10%的SDS-PAGE中表观分子量与其理论分子量相去甚远。我在100kD附近发现有三条主带，而且胞浆和核内的表观分子量还不太一样，而理论分子量只有66KD。请问您是否也发现类似现象？觉得是什么原因呢？
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5楼2013-03-06 10:50:06
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peakg7

新虫 (小有名气)
的确不一样，但是只有一条带，建议你换一支novus的nrf2抗体试试，我们只有一条带。
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6楼2013-03-06 18:56:39
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jojo然

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by crystalfrog at 2013-03-06 10:50:06
我在HeLa细胞中做的Nrf2，用的是Cell Signaling的抗体。发现其在10%的SDS-PAGE中表观分子量与其理论分子量相去甚远。我在100kD附近发现有三条主带，而且胞浆和核内的表观分子量还不太一样，而理论分子量只有66KD。 ...

现在有一篇文章说，nrf2的蛋白分子量其实是在95-110KD之间.....
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7楼2013-05-02 15:34:07
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crystalfrog

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jojo然 at 2013-05-02 15:34:07
现在有一篇文章说，nrf2的蛋白分子量其实是在95-110KD之间........

你是说那个在大肠杆菌中表达Nrf2的那篇吗？貌似看过。作者说凡是主带在70KD附近的文章都是有问题的，之前的抗体筛选也是有问题的，把我乐了半天
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8楼2013-05-03 08:33:00
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iamcolleen

新虫 (初入文坛)
xuexi
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10楼2014-01-01 09:13:31
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